GPC标准品的选择

btcputus

2011/11/17

私聊

分析化学

GPC标准品的选择—Pullulan，Dextran和PS-OBG
目前，高分子碳水化合物正被广泛应用于食品，啤酒，制药等行业，如香菇多糖，羧甲基纤维素，透明质酸，半乳甘露聚糖等，但对于不同分子量的碳水化合物来说，它们的作用都是不同的，因此在工业生产和科学研究中对于准确测定高分子碳水化合物的分子量就显的尤为重要。
目前，绝大数公司，高校和科研院所都使用凝胶渗透色谱（GPC）法来测定高分子物质分子量，这种方法相对于光散射法来说具有操作简单，经济快速等优点，因此在各行业得到广泛的使用。对于这种方法来说，在测定待测样品时，需要选择标准品来做标准曲线，因此对于准确测定高分子碳水化合物的分子量来说，标准品的正确选择就显得尤为重要。
Pullulan和Dextran是两种从微生物中提取的多糖，主要被用于分子量的测定，但是通过研究我们发现这两种多糖在水溶液中的构象为一个球状线团，他们的MH系数α为0.5左右，而上面我们提到的香菇多糖，羧甲基纤维素，透明质酸，半乳甘露聚糖等高分子物质在水溶液中的结构为扩展性构象，因此当我们用Pullulan和Dextran作为标准品来测定这些具有扩展性链结构的大分子物质分子量时，是不是可以准确测定它们的分子量呢？

为了进行对比研究，我们选择了另一种分子量测定标准品燕麦β葡聚糖（PS-OBG，来源于百特纯大分子有限公司），该标准品时从燕麦细胞壁中提取的，结构单元为葡萄糖，与Pullulan和Dextran相同，但它是由β-1，4和β-1，3键连接而成的线性结构，在水溶液中呈现扩展性构象，MH系数α为0.71.
实验材料：
待测样品：
香菇多糖（PLE），羧甲基纤维素(CMC)，半乳甘露聚糖(GG)
葡聚糖标准品套盒：
Shodex公司的pullulan-82（p-82），该套盒有8个点，分子量从5000到800000，
百特纯大分子有限公司的通用分子量套盒（PS-OBG-GMw），该套盒有8个点，分子量从11000到89000
实验方法：
分别用GPC法和光散射(LLS)法来测定该样品的分子量
试验结果：

表：三种不同物质分子量的测定结果
Samples Mw1 Mw2 Mw3
PLE 707k 1160k 790k
GG 122k 331k 112k
CMC 130k 354k 148k

Mw1 : 用PS-OBG-GMw 套盒测定值
Mw2：用Pullulan-82 套盒测定值
Mw3 : 用光散射测定值

从表一中我们可以发现用pullulan-82来测定这些具有扩展性链结构的大分子物质时，会导致明显的过高测定，之所以会出现这样的情况，是因为对于同样分子量的标准品来说，球形线团结构在GPC柱子中流出时间要比扩展性结构的流出时间长，而用PS-OBG来测定的话，测定值则非常接近光散射值，因此在对于大多数植物及真菌类多糖和具有扩展性链结构的大分子物质来说，用PS-OBG来测定是非常适合的。