仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

求助关于凝胶色谱(GFC)的相关问题

  • xiaoxin2809
    2011/12/21
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 思考了半天要把这个帖子发到哪里,确实有凝胶色谱的版块,却是GPC的,我要做的GFC也只是把凝胶柱装到普通液相上,而且这里专家也多,应该更能帮我解决问题,所以发到这里了。
    言归正传,我是一个凝胶色谱的新手,之前只用葡聚糖凝胶做过分离,还是自己装的柱子,这次要做一种药的含量测定,美国药典已有方法,用了
    PolySep-GFC-P3000的柱子,打听了一下要8000多,有点贵,想找找有没有类似的柱子可能会便宜点,虽然有一点现成的资料,但我也要知道原理才行啊!这样问题就出来了,刚刚在网上找了半天,发现对于凝胶色谱的资料很少,而且大部分还是GPC的,图书馆也去了,没有收获。以下是我的问题:
    1.用凝胶色谱测定分子量和质量分布的原理是什么呢?我知道凝胶色谱的分子排阻原理,这和测分子量有什么关系呢?色谱图的横坐标是时间吗?还是别的单位?
    2.我要做的物质是含量测定,这是一种多取代混合物,其主成分的分子量范围是1000多到2000多(就是我要测含量的部分),当然也有一些小分子量的杂质,大部分不超过1000,那我在选择柱子(主要是排阻限)时有没有什么原则或依据呢?(虽然美国药典有明确的方法和柱子,我还是想知道)
    3 对于GFC的凝胶应该也有好多种,他们之间只是在分离中分子量的差别吗?性质上有没有差别?拿我的情况为例吧,我要对一水溶性药物做含量测定,在选择柱子时只需考虑两点:1 用于水溶性的凝胶 2 选择合适的能分离的分子量。这就够了,也就是说如果有两种不同的凝胶,只要能满足上述两点,那我用哪种都能达到实验目的,这样理解对吗?

    先谢谢给位老师朋友不吝赐教!
    +关注 私聊
  • belindayy

    第1楼2011/12/21

    先回答你第一个问题,凝胶色谱是基于体积排阻的原理,固定相相当于分子筛,分子量大的物质只能通过凝胶颗粒间的缝隙,所以在色谱上先出峰,分子量小的颗粒能够进入凝胶颗粒中,在色谱柱中走的路径长,后出峰,所以就按分子量的大小分开了。色谱图的横坐标是时间

1
    +关注 私聊
  • xiaoxin2809

    第2楼2011/12/21

    分子排阻的原理我知道,我的意思是:例如这篇文章 凝胶色谱法测定木素分子量及其分布 ,表面上看是不是根据色谱图就能看出被测物质的分子量呢?

    belindayy(belindayy) 发表:先回答你第一个问题,凝胶色谱是基于体积排阻的原理,固定相相当于分子筛,分子量大的物质只能通过凝胶颗粒间的缝隙,所以在色谱上先出峰,分子量小的颗粒能够进入凝胶颗粒中,在色谱柱中走的路径长,后出峰,所以就按分子量的大小分开了。色谱图的横坐标是时间

0
    +关注 私聊
  • xydell

    第3楼2011/12/22

    GPC和GFC的原理是一样的,都是体积排阻,不过一个用有机相,一个用水相。
    色谱图的横坐标还是时间,只不过这个时间是和分子量大小相关的。
    选柱子就是根据你要做的样品分子量大小来选的,不同的柱子排阻限是不一样的。虽然是跟分子量相关,但是分子的结构也会有一定的影响。
    还有一点,凝胶色谱柱确实是比较贵。

0
    +关注 私聊
  • flyaway

    第4楼2011/12/22

    建议楼主找点GPC 原理的文章看看.

    顺便我也问问, 楼主你在做HPLC的时候,能不能看看峰面积就知道最终的含量是多少呢?

    xiaoxin2809(xiaoxin2809) 发表:分子排阻的原理我知道,我的意思是:例如这篇文章 凝胶色谱法测定木素分子量及其分布 ,表面上看是不是根据色谱图就能看出被测物质的分子量呢?

0
    +关注 私聊
  • xiaoxin2809

    第5楼2011/12/22

    我还有一点不明白的,拿普通柱为例吧,同样的C18柱或氨基柱,不同厂家的柱子填料会不一样,键合的基团也会不同,在分析同一样品时其色谱行为可能会有差异。那对于凝胶柱也有这种情况吗?还是说不同厂家的凝胶柱即使填料和键合的基团不一样,只要排阻限一样那么色谱行为就可认为没差别。

    xydell(xydell) 发表:GPC和GFC的原理是一样的,都是体积排阻,不过一个用有机相,一个用水相。
    色谱图的横坐标还是时间,只不过这个时间是和分子量大小相关的。
    选柱子就是根据你要做的样品分子量大小来选的,不同的柱子排阻限是不一样的。虽然是跟分子量相关,但是分子的结构也会有一定的影响。
    还有一点,凝胶色谱柱确实是比较贵。

0
    +关注 私聊
  • flyaway

    第6楼2011/12/22

    除了溶剂不同,我从来没有觉得GPC 和 GFC有本质性的区别.

0
    +关注 私聊
  • xiaoxin2809

    第7楼2011/12/22

    那我就找找GPC的文献吧,GFC的太少了

    flyaway(flyaway) 发表:除了溶剂不同,我从来没有觉得GPC 和 GFC有本质性的区别.

0
    +关注 私聊
  • flyaway

    第8楼2011/12/22

    很难找到排阻限一模一样的两个品牌的凝胶柱.

    xiaoxin2809(xiaoxin2809) 发表:我还有一点不明白的,拿普通柱为例吧,同样的C18柱或氨基柱,不同厂家的柱子填料会不一样,键合的基团也会不同,在分析同一样品时其色谱行为可能会有差异。那对于凝胶柱也有这种情况吗?还是说不同厂家的凝胶柱即使填料和键合的基团不一样,只要排阻限一样那么色谱行为就可认为没差别。

0
    +关注 私聊
  • xhwy2010

    第9楼2011/12/22

    楼主需要的柱子8000多不算贵了,类似的柱子有1万多的,就按照药典的规格买好了,当然也可以找替代,填料如果相同或相似恐怕也不会便宜,如果填料不相同买其它的可能还不行,药典方法不能随便改吧?GFC分子量测定一般用标准品做校正曲线来测定,但如果不用同系物的标样校正,误差经常会很大。楼主如果做药品含量用外标定量就可以了。

0
    +关注 私聊
  • xiaoxin2809

    第10楼2011/12/22

    而且到现在我还不明白什么情况下的含量测定会用凝胶柱,普通的C18不行吗?

0
查看更多
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...