仪器信息网APP

选仪器、听讲座、看资讯

立即体验

当前位置：仪器社区 >色谱 > 液相色谱（LC） > 帖子详情

HPLC四元低压系统双泵混合（等度）样品保留时间漂移问题的解决

binking721

2011/12/31

液相色谱（LC）

色谱条件：waters Alliance2695 系统，2489检测器。
waters symmetry C18 150*2.1mm，3.5um。
柱温30℃，样品温度15℃，进样量10ul，运行时间40min。
流动相：乙腈-水39:61 流速0.4ml/min
当流动相预先混合好后用单泵运行时，样品保留时间很稳定
但当A泵走乙腈，B泵走水以相同比例混合运行时，保留时间却一直在漂移这图太难看就不上了。
步骤一，工程师
开始查找原因，首相想到的是是不是双泵走的比例不稳定，如果是这样的话仪器就是有问题的。
找工程师测试，色谱条件甲醇：水（40:60）双泵运行，柱温32度，样品时温度15，流速1ml/min，色谱柱symmetryC18，4.6*75mm，3.5um。结果三个峰保留时间都很稳定，仪器没问题，保留时间数据如下表。
步骤二，旧柱预测试
只能开始用我们自己的方法查找原因，新柱子舍不得用，用旧的。
运行到第10针以后保留时间才开始稳定。
思考中：是不是因为该色谱柱长时间未使用而需要比较长的时间平衡？如果是这样，那我将该色谱柱保存在流动相中，第二天继续该实验的话，他的保留时间应该会很快稳定吧，就这么做了。

步骤三，旧柱保存与流动相后实验
第二天的数据如下，运行200多分钟以后保留时间开始稳定。
思考中：看来是有平衡的原因，但为什么还需要200多分钟才稳定呢，不正常。
步骤四，保留时间稳定的系统不停换新色谱柱
既然现在保留时间已经稳定，我是不是可以换一个色谱柱（系统不停）看看呢？就这么做，换新柱（相对旧柱来说），平衡30分钟，进样，保留时间很稳定，如下表。
思考中：现在开始怀疑两点。1.是不是旧柱已经不行了？2.是不是走双泵的时候仪器需要预热？
为了确定以上两点，下面开始两个实验（步骤五，步骤六）。
步骤五，新柱保存于流动相后第二天开机运行
将新柱保存流动相中，第二天重新开机运行（与上面旧柱的那个步骤作比较）。
先平衡100分钟，然后进样。数据如下。
前几针保留时间不稳，加上之前平衡的时间，差不多也是运行了200分钟之后保留时间才开始稳定，和旧柱差不多。现在基本上可以肯定我的第二个猜想了。
步骤六：证明双泵运行需预热
将仪器开启，双泵运行，但是不接色谱柱，将流速开到1.5ml/min，运行40分钟，0.4的流速平衡色谱柱，进样，数据如下。
除第一针外，保留时间相当稳定。
原因分析，待续。

相关话题

tangtang

第1楼2011/12/31

泵的流量稳定吗？

0

小不董

第2楼2011/12/31

应助达人

把你装乙腈的瓶子清洗下，换个试剂试一试

0

titi

第3楼2012/01/01

期待您完善后在参赛哦！！

0

蓝人

第4楼2012/01/01

应助达人

等待谱图。。

0

binking721

第5楼2012/01/04

[quote]原文由 小不董(doxw0323) 发表:把你装乙腈的瓶子清洗下，换个试剂试一试[/quot
应该跟这个没多大关系，并不是偶尔一次出现这种现象。

0

binking721

第6楼2012/01/04

应该是稳定的，用waters的测试结果保留时间很稳定。
tangtang(tangtang) 发表:泵的流量稳定吗？

0

tangtang

第7楼2012/01/04

很详细的数据，期待后续更新。

0

老多_小多

第8楼2012/01/05

楼主要赶快完善完毕，已经开始了评分，否则会影响的的作品分数的哟

0

近期热榜

热门活动

猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐

品牌合作伙伴

日立科学仪器

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

日本电子株式会社

赛默飞世尔科技

马尔文帕纳科

上海仪电科仪

梅特勒托利多

布鲁克核磁

举报帖子

点赞用户

好友列表

加载中...

正在为您切换请稍后...