3.氨基柱的使用:
需要注意的是,氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解,所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备,特别是当你的使用条件是反相条件下时。反相条件下使用时,要特别注意控制PH值范围,PH值越低越有发生水解的危险,流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以,在使用后以及准备长时间放置该柱时,必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。
另外,氨基键合相在性质上与硅胶有很大的差异,主要是由于Si-OH基显酸性,而-NH2基显碱性的原因。在用水/乙腈为流动相是,可分离极性化合物,在酸性介质中氨基键合相表现为一弱阴离子交换剂。由于氨基具有形成氢键的能力,在水/乙腈作流动相是可分离单糖,双糖和多糖,这时所用的流动相好像是反相的,但由于流动相中水含量的增加使保留减少,所以是按正相方式分离的。有一种情况是,当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时(分析其中的糖份),酸性物质的存在意味着质子的存在,可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。这时,可以用5倍的柱体积的含0.5%NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨)。
需要特别注意的是,键合相中端基氨基易于氧化,易于与羰基化合物反应,因此在使用氨基键合相时,在流动相中和在样品中应不含羰基化合物。