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[资源集锦] 酶标仪的工作原理及其用途

省部重点实验室

2012/02/24

生命科学仪器综合讨论

光是电磁波，波长100nm～400nm称为紫外光，400nm～780nm之间的光可被人眼观察到，大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪的检测原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。
　　检测单位：
　　光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
　　检测单位用OD值表示， OD是optical delnsity(光密度)的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度， OD=1og(1/trans)，其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则，OD值与光强度成下述关系：
　　E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度，Ι0 为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。
　　OD值由下述公式计算：
　　E=OD=C×D×E
　　C为检测物的浓度
　　D为检测物的厚度
　　E为摩尔因子
　　在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。
　　但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。
　　Anthos 酶标仪检测值计算
　　仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为 0%，没有检测物的透光值为100%。则实际检测中，检测物的透光值均在 0%一100%之间。透光值的计算如下：
　　T=(Meas—Min)/(Max—Min)
　　其中T为透光值， Meas为检测的二进位数值，Min为在 0%的情况下检测的二进位数值， Max为在100%的情况下检测的二进位数值，举例如下：
　　MaX=3600 Mn=20Meas=30
　　T=(30-20)/3600-20)=0.0028
　　OD=1og(1/T)=1og(1/0.0028)=2.552
　　Anthos 酶标仪的中心定位
　　仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时，仪器其实要进行35个点的测量，选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。
　　光源的参照通道
　　参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。
　　酶标仪的用途和其它提示
　　用于ELISA试剂的测定，广泛用于各种实验室，包括临床实验室。
　　质量控制
　　质量控制是试剂检测的重要因素。请按照试剂说明书的要求进行质量控制。
　　空白校正
　　有一些试剂盒的说阴书将空白孔设置为空气，其它大多数空白孔的设置是用试剂来设置的，请按照试剂盒的说明书要求进行。
　　检测结果的解释
　　由于有相当多的因素会影响检测的结果，如不同的酶标板，检测试剂的体积，都会造成OD值的不同，因此，只有使用同一酶标板反应的试剂检测结果才能比较和分析。对结果的临床解释请依照试剂盒的说明书进行。酶标仪的检测原理。

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yuduoling

第1楼2012/02/25

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