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分离的细菌如何鉴定?
省部重点实验室
2012/04/24
私聊
生命科学仪器综合讨论
问
:
分离的细菌如何鉴定
?
答
:
细菌的传统鉴定
1.
形态特征及染色结果
①
革兰氏染色
②
鞭毛染色
③
荚膜染色
④
细胞壁染色(
NaCl
法:
1.
取
1d25%NaCl
溶液于洁净的载玻片上。
2.
挑一环培养
6h
的细菌在
25%
的
NaCl
中涂匀,自然凉干。
3.
滴加
0.01%
的结晶紫于其上,
30s
后水洗干燥,油镜观察。)
⑤
抗酸染色
2.
培养特征观察取菌龄
24-28h
的菌
3.6
接种于
PDA
平板,
PDA
斜面,营养肉汤中培养
24h
,进行琼脂柱,明胶穿刺培养,
30
℃
培养
24h
。
3.
生理生化实验需氧性测定和运动性测定:将斜面培养
24h
的待测菌用接种针穿刺到培养基管底,
3d
后观察变化。如果菌落沿培养基表面生长,表明为好氧菌,反应为阳性,如果菌落沿穿刺线生长,反应为阴性。培养基成分:蛋白胨
0.2g
,
NaCl0.5g
,
K2HPO40.2g
,琼脂
0.5-0.6g
,葡萄糖
1.0g
,水
100ml
。
4.
生长温度测定在肉汤培养基(外加
1%
葡萄糖)中用接种针接种,在恒温水浴锅中不同温度下(
4
℃
,
10
℃
,
15
℃
,
20
℃
,
25
℃
,
30
℃
,
35
℃
,
40
℃
,
45
℃
,
50
℃
,
55
℃
)下培养
2-5d
观察生长情况,测定
OD
值,做温度曲线,确定最适生长温度,最高生长温度和最低生长温度。
5. PH
测定在肉汤培养基(外加
1%
葡萄糖)中分别用
HCl
,
NaOH
调
PH3.0
,
4.0
,
5.0
,
6.0
,
7.0
,
8.0
,
9.0
,
10.0
吸取定量的
24h
培养汤
28
℃
培养
24h
,测培养液的
OD
值,做
PH
曲线。
6.
耐盐实验采用
PDA
液体培养基,分别加入
NaCl
,分别配成
0%
,
5%
,
7%
,
10%
的系列浓度,采用直针接种,
28
℃
培养
7d
,在第三天和第七天各观察一次菌株生长情况。
7.
采用西蒙斯氏柠檬酸盐培养基(
NaCl0.5g
,
MgSO4●7H2O0.02g
,(
NH4
)
2HPO40.1g
,柠檬酸酸钠
0.02g
,琼脂
1.2g
,蒸馏水
100ml
,溴百里酚兰少量,斜面接种并设空白对照,
28
℃
培养
7d
,观察显色情况。
8.
接触酶试验将待测菌菌株在
PDA
斜面上
28
℃
培养
24h
,滴入
10%H2O2
,观察有无气泡产生。
9.
脲酶试验将待测菌接种于
PDA
斜面,在
3
,
7
天进行脲酶产生测定。方法:在空试管中,将斜面菌台做成菌悬液,加一滴酚红指示剂,调
PH
到
7
,即酚红刚刚转黄呈橙黄色,再将此菌液分做
2
份,在其中一管中加入少量的晶体尿素(约
0.05g-0.1g
),另一管不加尿素作对照,观察显色情况。
10.
糖,醇类发酵试验培养基:(
NH4
)
2HPO40.1g
,
MgSO4●7H2O0.02g
,酵母浸膏
0.02g
,琼脂
0.5-0.6g
,葡萄糖
0.1g
,水
100ml
。秀甲酚紫少许中加入
1%
甘油,木糖,三梨醇,蔗糖,甘露醇,阿拉伯糖代替葡萄糖。将斜面培养
24h
的待测菌穿刺到上述培养基上培养
5d
,观察培养基的变化情况。
11.V-P
试验于液体培养基(蛋白胨
0.5g
,葡萄糖
0.5g
,
NaCl0.05g
,蒸馏水
100ml
,
PH7.0-7.2
)中接种待测菌菌株,
2d
后取出培养液和
40%NaOH
等体积混合,加入少量肌酸猛烈震荡
3Min
后,观察培养液的颜色变化。
12.
硝酸盐还原试验将待测菌接种于硝酸盐液体培养基(肉汁胨培养基
1000ml
,
KNO310g
,
PH7.0-7.2
)
2
管做空白对照,培养
2d
后,取
2
支干净的空试管倒入少许培养液,各滴入
1dA
液(对氨基苯磺酸
0.5g
,
10%
稀醋酸
150ml
)及
B
液(
ā-
萘胺
0.1%
,蒸馏水
20ml
,
10%
稀醋酸
150ml
)对照管中同样加入
A
,
B
液各一滴,观察颜色变化。
13.
淀粉水解将培养基(肉汁胨中加入
2%
的可溶性淀粉)倒成平板,倒置过夜后,接种新鲜的菌种,
28
℃
培养
48h
,待形成菌落后,滴加
2
滴碘液于菌落周围,观察菌落周围培养基颜色的变化。
14.
明胶液化培养基(蛋白胨
0.5g
,明胶
10-15g
,蒸馏水
100ml
,
PH7.2-7.4
)取
24h
培养菌穿刺接种,设空白对照于
20
℃
培养箱中培养,观察明胶的液化情况。
15.H2S
试验产生试验培养基(蛋白胨
1g
,
NaCl0.5g
,牛肉膏
0.75g
,明胶
10-12g
,
FeCl2
微量,水
100g
,
PH7.0
)穿刺接种,
30
℃
培养观察培养基的颜色变化。
16.M.R.
试验(甲基红)培养基(蛋白胨
0.5g
,葡萄糖
0.5g
,
NaCl0.05g
,水
100ml
,
PH7.0-7.2
)接种待测菌菌株于培养基中
30
℃
培养
6
天,在培养液中加入一滴甲基红试剂,观察颜色变化。
17.
纤维素分解实验采用蛋白胨液体培养基接种待测菌,同时浸泡一条灭菌的优质新化滤纸,观察
1-4
周滤纸片的变化情况。
关键词:细菌鉴定
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