色谱柱/前处理小柱: | ProElut SCX 500mg / 3ml 50/pkg ProElut C18 500mg/3mL 50/pkg |
样品前处理: | 1、提取 10 g 与20 mL 0.1% 磷酸溶液,涡旋混合5 min,待净化。 2、净化 ProElut SCX 500 mg/3 mL (Cat.#63604) a 活化: 将5 mL 甲醇、5 mL 水加入小柱,流出液弃去; b 上样: 将样品加入小柱*,流出液弃去; c 淋洗: 依次用5 mL 0.1% 磷酸溶液、5 mL 水淋洗,流出液弃去; d 洗脱: 30 mL 0.2 mol/L 磷酸氢二钾溶液(磷酸调节pH 8.0),洗脱,收集洗脱液,用磷酸调节pH 2,待下一步净化 ProElut C18 500 mg/6 mL (Cat.#63104) a 活化: 将5 mL 甲醇、5 mL 水加入小柱(ProElut C18,500 mg/3 mL),流出液弃去; b 上样: 将样品加入小柱*,流出液弃去; c 淋洗: 5 mL 0.1% 磷酸溶液淋洗C18 柱,流出液弃去,抽干小柱,再用5 mL 甲基叔丁基醚+ 正己烷混合溶液(4+1)淋洗,流出液弃去; d 洗脱: 10 mL 甲醇洗脱,收集洗脱液 e 重新溶解:35 ºC 下将洗脱液减压蒸馏至干,1 mL 流动相定容,微孔滤膜过滤后,HPLC 分析 注:由于样品量超过柱容量,应分次上样或在SPE 柱上安装12 mL 储液管 (Cat.#4810),适配器 (Cat.#4803) |
色谱条件: | 色谱柱:Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #99601) 流动相:缓冲溶液/ 乙腈 流速:1.0 mL/min 进样量:20 μL 检测器:荧光检测器,激发波长:263 nm,发射波长:435 nm |