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HPLC测定丙戊酸钠血药浓度的疑问

hiyvon

2012/03/22

液相色谱（LC）

医院要开展hplc测定丙戊酸钠血药浓度，正在摸索方法，看文献都懵了
1、几乎血药浓度监测的所有文献都提到用柱前衍生法，原因何在？
如果是因为羧酸的紫外吸收在203nm，那么用截止波长较低的乙腈190nm做流动相不可以吗？

2、衍生化时三乙胺作为催化剂和改性试剂，浓度应为多少？我看文献有的用0.05%，有的高达10%。一定要用乙腈稀释吗？浓度太高会不会对柱子影响很大？进样前还要不要再测一下PH值？

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有水有渝

第1楼2012/03/22

应助达人

1、要衍生一般用的是紫外检测器或荧光检测器，如果不衍生灵敏度太低，检测不到低浓度的丙戊酸钠。可以使用乙腈，但使用203nm可能存在基线波动大，杂质干扰多，对前处理要求比较高。
2、你的流动相是什么，如果是缓冲体系问题不大，用多少的三乙胺合适你完全可以通过实验验证一下。

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happy水中月

第2楼2012/03/22

衍生不光是波长的问题，还有个吸光度的问题，如果吸收系数很小的话，浓度低的检测限就不好。

hiyvon(hiyvon) 发表:

医院要开展hplc测定丙戊酸钠血药浓度，正在摸索方法，看文献都懵了
1、几乎血药浓度监测的所有文献都提到用柱前衍生法，原因何在？
如果是因为羧酸的紫外吸收在203nm，那么用截止波长较低的乙腈190nm做流动相不可以吗？

2、衍生化时三乙胺作为催化剂和改性试剂，浓度应为多少？我看文献有的用0.05%，有的高达10%。一定要用乙腈稀释吗？浓度太高会不会对柱子影响很大？进样前还要不要再测一下PH值？

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hiyvon

第3楼2012/03/22

流动相是甲醇：水=75:25

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hiyvon

第4楼2012/03/22

也有测定片剂含量的文献中提到用反相离子对色谱法，加入的是氢氧化四丁基铵。离子对试剂的加入是改善了保留时间还是增强了紫外吸收呢？

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