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求助多肽药物血浆样品液相进样前处理方法

Insm_58a42158

2019/01/15

液相色谱（LC）

本人正在使用岛津HPLC做一条肽的药代动力学，用的C18硅胶柱，流动相是水和乙腈梯度洗脱（都含有千分之一三氟乙酸），求做过多肽血浆样品的高手给一些血浆处理方法的建议，目前使用乙腈沉淀法发现峰几乎检测不到，加了点甲酸好一点。参考文献中做万古霉素的方法，血浆样品加入25%三氯乙酸酸与乙腈（2:1），药品的峰还是特别小。使用乙酸乙酯萃取法也做了，提取下层水层，也是没有峰，而且血浆中杂蛋白特别多。多肽药做血浆样品是不是不能用乙腈沉淀法呢？调整乙腈的比例会出现理想的效果吗？
最近几天测纯样品（当天解冻的)不加到血浆里发现目标峰面积表小很多，内标就比较正常，不清楚是柱效问题还是紫外检测器问题。
以上问题求高手给一些建议，感激涕零！

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检测老菜鸟

第1楼2019/01/15

应助达人

多肽类药物没做过，建议查一下乙腈沉淀蛋白会不会影响多肽，这个没有了解过，不好回答，第二个，内标峰没变，目标峰面积小有可能跟你目标峰保存条件有关，也有可能跟你目标物本身有关系，跟检测器应该没啥关系。

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清酒华章

第2楼2019/01/15

今天在纯溶液里加了乙腈(含1%甲酸)，打算看看溶解情况，目标物色谱峰出现了但是特别小，内标肽倒是响应还不错，我在想是不是应该调整乙腈的比例呢？
检测老菜鸟(v3295053) 发表:多肽类药物没做过，建议查一下乙腈沉淀蛋白会不会影响多肽，这个没有了解过，不好回答，第二个，内标峰没变，目标峰面积小有可能跟你目标峰保存条件有关，也有可能跟你目标物本身有关系，跟检测器应该没啥关系。

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夏天的雪

第3楼2019/01/15

应助达人

是不是目标肽也被沉淀了，内标物没有沉淀。三氯乙酸、亚铁氰化钾和乙酸铵都是沉淀蛋白质的试剂，可以试试这几种试剂。或者更换前处理方法

1

有水有渝

第4楼2019/01/16

应助达人

如楼主所言，要先做一下纯品在蛋白沉淀体系中的溶解情况，溶解好的体系才能使用。

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清酒华章

第5楼2019/01/23

谢谢
有水有渝(xky0230699) 发表:如楼主所言，要先做一下纯品在蛋白沉淀体系中的溶解情况，溶解好的体系才能使用。

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Ins_34fe5f86

第6楼2023/05/09

请问三氯化铁和样品以什么比例沉淀蛋白？
夏天的雪(bingwang228) 发表:是不是目标肽也被沉淀了，内标物没有沉淀。三氯乙酸、亚铁氰化钾和乙酸铵都是沉淀蛋白质的试剂，可以试试这几种试剂。或者更换前处理方法

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