β-胡萝卜素的含量测定方法验证

youjingshui

2012/03/30

私聊

厂商论坛

β-胡萝卜素的含量测定方法验证【CNW的色谱柱：Athena C18-WP；4.6*150mm，5μm】，分离效果良

好。

β-胡萝卜素的含量测定方法验证

仪器：Shimadzu-20A型高效液相色谱仪；TGL-10C型离心机；KQ-500E型超声仪。

试剂试药：甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；石油醚（分析纯，沸程30℃～60℃）；三氯甲烷（分析纯）；β-胡萝卜素对照品（来源：Dr；批号：00817；含量：97.0%）；

分析方法及条件：（HPLC法）

色谱条件

色谱柱：厂家：CNW，Athena C18-WP；4.6*150mm，5μm

流动相：甲醇:乙腈=90:10

流速：1.2ml/min

柱温：28℃

进样量：50µl

检测器：紫外检测器448nm

运行时间：20min

1、线性范围确认：

1.1试验方法：

对照品贮备液的配制：精确称取β-胡萝卜素约12 mg于100mI容量瓶中，用约50mI三氯甲烷溶解后，再用石油醚（沸程30℃～60℃）定容至刻度，超声10分钟，使β-胡萝卜完全溶解，放冷至室温，摇匀，浓度约为120μg /mL，放在-18℃的冰箱中储存备用。

1.2标准工作曲线绘制：

精密吸取β-胡萝卜素标准贮备液2.00mL于50mL容量瓶中，加流动相至刻度，超声10分钟，使β-胡萝卜完全溶解，放冷至室温，摇匀，即得β-胡萝卜素标准使用液（浓度约为4.8μg /mL），经0.45μm的微孔滤膜过滤，取滤液分别进样5ul、10ul、20ul、30ul、40ul。

1.3试验数据：（色谱图见图1）

标准序号	浓度C（ug/ml）	β-胡萝卜素峰面积(A)
STD1	0.4423	82355
STD2	0.8846	166276
STD3	1.7693	332095
STD4	2.6539	497575
STD5	3.5386	662194
线性方程	C=5.341×10^-6A-1.583×10^-3
相关系数(R)	1.0000

1.4试验结论：

线性评价：相关系数 R为1.0000,所以用该方法测定β-胡萝卜素的含量，在浓度为0.4423ug/ml至3.5386ug/ml之间呈现良好的线性。

2、精密度试验：

2.1β-胡萝卜素标准贮备液的配制：精确称取β-胡萝卜素约12 mg于100mI容量瓶中，用约50mI三氯甲烷溶解后，再用石油醚（沸程30℃～60℃）定容至刻度，超声10分钟，使β-胡萝卜完全溶解，放冷至室温，摇匀，浓度约为120μg /mL，放在-18℃的冰箱中储存备用。

2.2精密称取0.25g研磨均匀的样品，置于离心管中，精密加入20ml流动相，超声30min，以8000转/分钟的转速离心5min，取上清液，经0.45μm的微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。

2.3标准工作曲线绘制：

精密吸取β-胡萝卜素标准贮备液2.00mL于50mL容量瓶中，加流动相至刻度，超声10分钟，使β-胡萝卜完全溶解，放冷至室温，摇匀，即得β-胡萝卜素标准使用液（浓度约为4.8μg /mL），经0.45μm的微孔滤膜过滤，取滤液分别进样5ul、10ul、20ul、30ul、40ul。

2.4试验数据：（色谱图见图2）

样品名称	序号	称样量（g）	峰面积	含量（µg/g）	平均含量（µg/g）或回收率（%）	平均回收率（%）	RSD（%）
20111008	1	0.2516	286005	122.24	119.7	———	1.6%
	2	0.2547	287342	121.32
	3	0.2509	280856	120.37
	4	0.2566	280930	117.72
	5	0.2481	271660	117.73
	6	0.2467	272621	118.82

2.5试验结论：6份样品含量的RSD（%）分别为：1.6%，其RSD（%）均小于2.0%，表明该方法有较好的精密度。

3、稳定性试验：

3.1试验方法：取β-胡萝卜素样品溶液（浓度约为1.5µg /ml）分别在室温下放置0小时、2小时、4小时、8小时、12小时取进样，进样量为50ul，计算其峰面积的相对标准偏差RSD（%），考察该方法的稳定性。

3.2试验数据：（色谱图见图3）

放置时间	β-胡萝卜素峰面积
0小时	289780
2小时	288107
4小时	285745
8小时	281467
12小时	277041
24小时	268857
RSD（%）	2.8

3.3试验结论：β-胡萝卜素样品溶液分别在室温下放置0小时、2小时、4小时、8小时、12小时、24小时，其峰面积的RSD（%）为：2.8%，其RSD（%）小于3.0%，表明β-胡萝卜素样品溶液在室温下24小时内的稳定性较好。

4、回收率试验：

4.1试验方法：

对照品和样品的处理方法见精密度试验。

加标样品的处理：精密称取0.25g研磨均匀的样品9份，置于离心管中，分成3组，每组3份，于每一组中分别精密加入β-胡萝卜素标准使用液（浓度约为4.8μg /ml）4.0 ml、5.0 ml、6.0 ml、再加流动相适量使成20 ml，超声30min，以8000转/分钟的转速离心5min，取上清液，经0.45μm的微孔滤膜过滤，作为加标溶液；取该加标溶液50ul进样。

4.2试验数据如下：（试验样品为：20111008）

回收率试验结果表（色谱图见图4）

样品名称	序号	称样量（g）	峰面积	含量（µg/g）	平均含量（µg/g）或回收率（%）	平均回收率（%）	RSD（%）
20111008	1	0.2516	286005	122.24	119.7	———	1.6%
	2	0.2547	287342	121.32
	3	0.2509	280856	120.37
	4	0.2566	280930	117.72
	5	0.2481	271660	117.73
	6	0.2467	272621	118.82
20111008+80%标	7	0.2674	460418	185.16	98.9%	101.6%	2.7%
	8	0.2631	459865	187.96	101.5%
	9	0.2598	460982	190.81	104.4%
20111008+100%标	10	0.2698	500629	199.54	97.4%	98.3%	1.4%
	11	0.2712	502772	199.36	97.7%
	12	0.2639	499301	203.46	99.9%
20111008+120%标	13	0.2668	541234	218.15	99.0%	100.1%	1.1%
	14	0.2631	540236	220.81	100.2%
	15	0.2601	539228	222.94	101.2%

测得对照品投入量=加标样品测得量- 样品测得量

回收率(%)=测得对照品投入量/投入量

4.3试验结论：加标80%、加标100%、加标120%的回收率分别为101.6% 、98.3%、100.1%，平均回收率为：100.0%，相对标准偏差（RSD）分别为2.7% 、1.4% 和1.1% ，均在可接受范围内(要求回收率在真实浓度的90.0%～110.0%,回收率的RSD值应≤5.0%。)。结果均符合可接受标准。

5.样品中β-胡萝卜素含量测定：

样品处理及对照品处理见精密度试验

含量测定试验结果表（色谱图见图5）

样品名称	序号	称样量（g）	峰面积	含量（µg/g）	平均含量（µg/g）或回收率（%）	平均回收率（%）	相对偏差（%）
20111008	1	0.2516	286005	122.24	121.8	———	0.4%
20111008	2	0.2547	287342	121.32	121.8	———	0.4%
20111004	3	0.2572	282469	118.09	117.6	———	0.4%
20111004	4	0.2593	282369	117.10	117.6	———	0.4%
20111007	5	0.2666	289200	116.65	116.0	———	0.5%
20111007	6	0.2689	288609	115.42	116.0	———	0.5%

试验结论：3批样品20111008批、20111004批、20111007批β-胡萝卜素含量均分别为121.8µg/g、117.6µg/g和116.0µg/g，均符合规定（质量标准要求为68.8～154.8µg/g）；分为0.4% 、0.4% 和0.5% ；均符合要求（要求：相对偏差≤5.0%）。

6.结论：通过对β-胡萝卜素的含量测定方法进行线性、稳定性、精密度、回收率试验，证明含量测定方法科学有效，能对中β-胡萝卜素的含量起到质量控制的目的。

附件：

β-胡萝卜素对照-40ul.pdf
HPLC法测定β-胡萝卜素含量测定方法验证资料.doc

精
该帖子已被管理者-吕梁山设置为精华，下面是奖励记录：加10积分,加5声望

分
该帖子已被版主-tangtang加5积分，加2经验;加分理由:youjingshui的原创，加5分。

相关话题

+关注

私聊

mark_luo

第1楼2012/03/30

嗯资料写得不错值得学习实验方法有点难度

+关注

私聊

tangtang

第2楼2012/03/30

请补充一下图片，比如色谱柱的照片之类的。

+关注

私聊

yuduoling

第3楼2012/03/31

非常不错的原创作品，可以参加原创大赛。要是象tangtang老师说的那个再补充一些图的话，就更完美

+关注

私聊

vcningmeng

第4楼2012/03/31

很不错的原创奥，不过最好有个柱子的图片，等我有空来编辑一下

+关注

私聊

vcningmeng

第5楼2012/03/31

加了个柱子外包装的照片和柱子的照片，这样的原创才完整

+关注

私聊

mark_luo

第6楼2012/03/31

这个需要有点基础才能看得懂辛苦读者了

+关注

私聊

shangyab513

第7楼2012/03/31

没有做过实验，确实有点难懂啊。弱弱的问一下，称取的12mg（97%）标准品，稀释成100ml之后的浓度为什么不是116.4μg /mL，而是120μg /mL呢？
mark_luo(mark_luo) 发表:这个需要有点基础才能看得懂辛苦读者了