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大家谈一谈手性柱的清洗及维护吧

  • wubin102628
    2012/05/07
  • 私聊

厂商论坛

  • 如题
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  • 童话仙子

    第1楼2012/05/07

    色谱柱可在pH 3.5-6.5范围和通常使用的缓冲液色谱系统中使用。但是在保存该种色谱柱时,必须用水/甲醇溶液(80-100%水)将分析后柱内残留的盐分和缓冲液全部冲洗干净,色谱柱必须储存在无盐的水/甲醇(50%甲醇)的条件下。如果可能可用适当浓度三氟乙酸 (THF)清洗除去残留,以再生色谱柱(仅供参考)。

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  • 童话仙子

    第2楼2012/05/07

    << 运行参数

    1、保持柱压低于3000psi
    2、如果出现高的背压,请逆向冲柱
    << 流动相使用注意事项

    1、流动相必须用HPLC级的试剂
    2、流动相必须使用高纯度化学试剂
    3、流动相使用前必须经脱气和过滤处理
    4、确保溶剂容易混合
    5、微量杂质会损害色谱柱
    6、当更换流动相时,推荐丙酮作为溶剂
    7、流动相允许的最高有机组成部分是100%,最高的水含量是95%
    8、当使用盐或缓冲溶液作流动相,应在实验完毕后及时冲洗柱子。
    9、检查样品的溶解度,尽可能使用流动相作为稀释剂。
    10、有机和无机的缓冲溶液浓度分别不能超过1.5%和0.3%

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  • wubin102628

    第3楼2012/05/07

    是不是不同填料的手性柱,其维护方法也不同?

    童话仙子(liling123436) 发表:色谱柱可在pH 3.5-6.5范围和通常使用的缓冲液色谱系统中使用。但是在保存该种色谱柱时,必须用水/甲醇溶液(80-100%水)将分析后柱内残留的盐分和缓冲液全部冲洗干净,色谱柱必须储存在无盐的水/甲醇(50%甲醇)的条件下。如果可能可用适当浓度三氟乙酸 (THF)清洗除去残留,以再生色谱柱(仅供参考)。

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  • 童话仙子

    第4楼2012/05/07

    << 保存柱子注意事项

    1、盐和缓冲溶液不能存储在柱内。
    2、用无盐或缓冲液的流动相冲洗柱子20-30分钟,以除去残留在柱内的盐或缓冲液。
    3、柱子的保存方法影响柱子的寿命
    4、柱子用异丙醇保存。当分析完成时,应用异丙醇冲洗,以确保柱子的寿命

    << 延长柱子寿命的方法

    1、不要用缓冲溶液保存柱子
    2、用易混合的溶剂/缓冲溶液
    3、在每次用缓冲液做流动相后都要清洗柱子,然后用异丙醇保存柱子
    4、在保存柱子期间,请每两个月用异丙醇冲洗一次
    5、水在溶液的含量为不能超过95%
    6、避免柱床干涸

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  • dahua1981

    第5楼2012/05/07

    应助达人

    填料不同维护肯定是有区别的

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  • 省部重点实验室

    第6楼2012/05/08

    若是正相模式下使用的手性柱的话,必须做的先遣工作是将液相系统从反相换成正相。具体可能的操作是这样的:
    1. 若RP-HPLC用到过缓冲液的话,先换成纯水,按照C18柱使用维护方法,将普通色谱柱洗好,封柱。
    2. 卸下常规反相C18柱后,直接用两通代替色谱柱将两部分管路连接起来,需用的2个通道都塞到水中,先用水洗去带走(可能用到的)缓冲液和乙腈(或者甲醇),然后同样地用异丙醇洗去带走水。最后再换上正相模式下的流动相(正己烷-异丙醇/乙醇)。
    3. 接上手性柱,预设定一个分离条件,平衡色谱柱,平衡好后才进样分析。

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  • 省部重点实验室

    第7楼2012/05/08

    手性柱ODH的清洗方法

    ODH色谱柱可在pH 3.5-6.5范围和通常使用的缓冲液色谱系统中使用。但是在保存该种色谱柱时,必须用水/甲醇溶液(80-100%水)将分析后柱内残留的盐分和缓冲液全部冲洗干净,色谱柱必须储存在无盐的水/甲醇(50%甲醇)的条件下。如果可能可用适当浓度三氟乙酸 (THF)清洗除去残留,以再生色谱柱(仅供参考)。

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  • 省部重点实验室

    第8楼2012/05/08

    1.长期保存色谱柱:
    如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。

    2.正相柱的再生:

    依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇、异丙醇、正己烷作为流动相冲洗色谱柱,然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必须严格脱水。

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  • 省部重点实验室

    第9楼2012/05/08

    << 固定相使用注意事项

    1、PH稳定范围:3.1—7.1
    若用户需要拓宽PH范围,请提前询问本公司。
    2、流速
    请根据下面的表格选择合适的流速。只要不超过柱压的局限值,在任何的流速下都不会损害柱子。

    硅胶粒径

    柱内径(mm)

    典型流速(ml/min)



    正相

    反相

    3

    4.6

    0.5-0.8

    0.3-0.5

    5

    4.6

    1.0

    0.5

    10

    10

    2.0

    1.0

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  • 省部重点实验室

    第10楼2012/05/08

    手性柱第一次使用

    若是正相模式下使用的手性柱的话,必须做的先遣工作是将液相系统从反相换成正相。具体可能的操作是这样的:
    1. 若RP-HPLC用到过缓冲液的话,先换成纯水,按照C18柱使用维护方法,将普通色谱柱洗好,封柱。
    2. 卸下常规反相C18柱后,直接用两通代替色谱柱将两部分管路连接起来,需用的2个通道都塞到水中,先用水洗去带走(可能用到的)缓冲液和乙腈(或者甲醇),然后同样地用异丙醇洗去带走水。最后再换上正相模式下的流动相(正己烷-异丙醇/乙醇)。
    3. 接上手性柱,预设定一个分离条件,平衡色谱柱,平衡好后才进样分析。

    动物组织或从土壤中提取的样品,这个做手性分析,前处理相当地相当地重要,尽可能地把不相关的基质去除,比如采用固相萃取、溶剂提取等来净化样品,然后用流动相或异丙醇/乙醇来溶解样品(溶解样品时,尽量采用流动相来溶解。chiral HPLC与RP-HPLC类似,也存在溶剂效应)。

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