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没有微量比色池也不愁

紫外可见分光光度计(UV)

  • 在紫外—可见分光光度计的使用中,标准比色池的样品容量是3毫升左右;当样品量很少且液面低于光轴时,单色器发出的用于测量光束(即光斑)照射不到样品溶液的侧面上,等于无法测量,尤其是萃取量很少的生化样品的分析。这点恐怕许多人都深有体会。见图-1所示:

    -1
    用标准比色池测微量样品的示意

    要想解决这个矛盾,一般的情况下,是将平时经常使用的标准比色池改为微量比色池,如图-2
    所示:

    -2
    改用微量比色池测试样品

    但是如果操作者手头一时没有微量比色池又怎么办呢?其实我们稍微动动手,问题则会迎刃而解。方法是:将一条宽度约为10毫米的白纸条插入到样品池的支架中;然后将波长调到530nm此时会在白纸条上看到一个长方形绿色的光斑(注意:仪器周边环境要保持暗一些,否则不易看到绿光斑),并用笔在光斑处坐上记号,如图-3所示:


    -3 用笔
    在白纸条上的光斑处做上记号

    找一块黑色的海绵(泡沫塑料也可),根据光斑(即光轴坐标)与池架底部的垂直高度和池架内部的长宽,将海绵裁剪成为一个合适尺寸的块状物。需要注意的是:海绵的高度要略小于光斑高度,具体小多少,要依据样品量而定;这样做的目的,是给比色池的安放留有余地。见图-4
    所示:

    -4
    裁剪海绵体


    将裁剪好的海绵安放到池架内,如图-5所示:

    -5
    放置海绵体

    最后将标准比色池放置在池架内的海绵上,注入少量的溶液,以液面超过光轴坐标的垂直高度即可;见图-6
    所示:

    -6
    安放标准比色池

    这种举措不但节省了溶液量和购置价格相对昂贵的微量池的费用,还有一个微量比色池不能比拟的优点,那就是:无需顾忌光斑与微量比色池透光槽的对位不良的问题。

    当然,这种举措也有它的局限性,就是样品量不能过少。为此、要根据所测试样品的平均量来剪裁海绵块的高度;海绵块的高度过高了,比色池同步也上抬了,光斑容易照到比色池的底部,造成测试误差;海绵块高度过低了,比色池随之下降,池子里注入的液体样品液随之增加了,这样则无谓地浪费了样品,没有体现出微量分析的初衷;因此做好二者高度的兼顾稍显麻烦些,需要有一定的耐心。谨记!
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  • happy水中月

    第1楼2012/06/03

    曾经想过把比色池太高的办法,但是没有办法知道光斑的具体的位置所以无法改进,有了安老师的办法就好办法了。

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  • ldgfive

    第2楼2012/06/03

    应助工程师

    我们实验室有全套的微量比色皿,不过楼主确实厉害

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  • ghostermen

    第3楼2012/06/03

    有些仪器的光斑很大,在微量比色皿前还得加透镜

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  • tutm

    第4楼2012/06/03

    an老师很强,实践经验很丰富。这个方法对有一定经验的用户可以试试、救救急。但本人觉得一般用户不太好这样使用。
    一是,这个办法能减少的溶液量有限,至少也要有1mL吧,再减少就很难了,而微量池只有几十uL。
    二是,除非使用者对仪器性能很熟悉,或者有经验丰富的人在现场具体指导,不然掌握不好高度,测试结果的可靠性会明显降低的。

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  • 夕阳

    第5楼2012/06/03

    应助达人

    呵呵! tutm老师所言极是。这,原本就是一篇实际操作的应急之帖。该措施的不足和受限,已经在文章的结尾标注出来了。
    因为近期紫外版面较为冷清,故受人之托,不顾“江郎才尽”之虞,冒昧地写了一篇下里巴人的帖子;其目的原本是为了活跃版面,没想到反而弄巧成拙了,让您见笑了!

    tutm(tutm) 发表:an老师很强,实践经验很丰富。这个方法对有一定经验的用户可以试试、救救急。但本人觉得一般用户不太好这样使用。
    一是,这个办法能减少的溶液量有限,至少也要有1mL吧,再减少就很难了,而微量池只有几十uL。
    二是,除非使用者对仪器性能很熟悉,或者有经验丰富的人在现场具体指导,不然掌握不好高度,测试结果的可靠性会明显降低的。

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  • tutm

    第6楼2012/06/03

    这个议题我觉得是启发的意义更多些,在理解仪器的构造基础上开拓使用仪器的思路是很有必要的。
    这些经验可能一般使用者不一定能想象着去做,因此应该对大家都是有启示的。
    确实,真正会这么做的用户可能不会多,但要能想到这么做也要相当功力才行。

    夕阳(anping) 发表:呵呵! tutm老师所言极是。这,原本就是一篇实际操作的应急之帖。该措施的不足和受限,已经在文章的结尾标注出来了。
    因为近期紫外版面较为冷清,故受人之托,不顾“江郎才尽”之虞,冒昧地写了一篇下里巴人的帖子;其目的原本是为了活跃版面,没想到反而弄巧成拙了,让您见笑了!

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  • an3003

    第7楼2012/06/04

    夕阳老师真有办法!

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  • 悠旸

    第8楼2012/06/04

    是个好办法,对于0.5-1ml的样品量应该是适合的。

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  • gy409409

    第9楼2012/06/04

    这种方法还是有局限性的,例如要考虑样品或者溶剂会不会和海绵发生溶解或者反应。

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  • 雨木霖

    第10楼2012/06/04

    貌似我们都是直接把比色皿抬高的。。。。

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