请教C18柱去除油脂杂质的详细操作步骤

应助达人

[quote]原文由 xj19232(xj19232) 发表:考虑到油脂与C18的吸附能力比较强，所以我将乙腈提取液（含66%乙腈）上样后，直接用6ml的乙腈洗脱，可是油脂全都洗出来了，详细步骤如下，我想应该是我的SPE步骤的问题：

样品：油脂样品经正己烷-乙腈萃取后取乙腈提取液，0.5ml该提取液+1.5ml乙腈+1ml水，混匀。
在C18柱普遍使用之前，通用的乙腈中除油的方法是在乙腈提取液中加入等量的经乙腈饱和后的正己烷，振荡分层后弃去正己烷，这样就能把油除去。

SPE柱：C18,500mg，3ml
这个规格做农残检测有点小了，我们10g毛豆样品，乙腈提取液过柱至少是用1g/6ml规格的，若能加到1.5g/6ml最好。
步骤：
a. 先后以6ml甲醇、6ml水对C18柱进行预处理；
b. 保持SPE湿润，3ml样品上柱，加负压，速度约1ml/min，抽干溶剂，收集流出液，标记为组分A；
c. 6ml乙腈洗脱，速度约1ml/min，抽干溶剂，收集流出液，标记为组分B；
d. 3ml乙腈洗脱，速度约1ml/min， 抽干溶剂，收集流出液，标记为组分C。

浓缩时发现，油脂全在组分B里，是我的SPE步骤有问题吗？莫非上样后不能抽干溶剂？（上样后的流出液和淋洗液都要的，最好不要抽干）再有就是，洗脱时我应该以66%乙腈浓度至100%乙腈浓度进行梯度洗脱，摸索合适的洗脱条件吗？
感觉您的方法里剩余油脂未除尽，应该是C18柱规格偏小所致（小柱饱和了），加大C18柱的量应该能解决油的问题。您可以再试试。

小柱的容量的确偏小，所以我上样时取的样品量比较少，想先试试效果，再买大容量的C18柱。
若是小柱饱和的话，组分A（上样后的流出液）里就应该有油脂呀？我认为组分A不含油脂，表明油脂完全被吸附在小柱上了。

上样后最好不抽干溶剂，是考虑到C18柱填料的性质吗？
我查了查资料，说C18使用前必须预处理目的是为了让碳链在水环境下完全展开，有助于吸附样品中的化合物，从这个出发点考虑的话，上样后务必不能抽干溶剂，否则碳链失去水环境而收缩，结合在碳链上的化合物会失去结合力，容易被溶剂洗出。
我这种想法对吗？

这样的话，多用乙腈饱和的正己烷萃取几次，岂不是就可以除掉油脂了？只是溶剂消耗量大，考虑离心的话，这方法还比较耗时间。

应助达人

是，C18柱比较强调柱床不能干。

应助达人

是，在以前没有C18柱时都是用正己烷除油的，我做过，效果也很好，就是浪费溶剂，费时间。

应助达人

您认为组分A里不含油脂，不是浓缩除去乙腈后能观察到没有油脂？

我把组分A浓缩去除乙腈后，观察发现没有油滴挂在管壁或管底，以此判断组分A不含油脂，组分B就明显能看到有很多油滴。虽然只是简单的判断，但是作为定性判断应该可以吧。

应助达人

如果含水乙腈能把您要的目标物也同时洗脱下来的话，那您可以考虑对比确认一下洗脱液也用乙腈水溶液。

恩，明白了，明天开工继续尝试。
首先保证C18柱床湿润，其次用不同浓度的乙腈水溶液洗脱。
谢谢雾版大。