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2.8 女贞子及其复方制剂色谱指纹图谱和质量控制研究

dahua1981

2012/07/16

作者：丁雪（第二军医大学）
摘要：

女贞子为传统补益类中药，应用已有数千年历史，具有广泛的临床应用基础。制定、完善和建立现代中药质量标准评价体系，使中药具备国际认可的标准规范是中药现代化的战略目标之一。用代表中药药效学物质基础的化合物群所表征的指纹图谱来综合评价中药质量，符合中医理论和中药化学成分的特点，能较全面地反映中药质量的本来面貌，并为国际认可。

本文联用几种现代检测分析技术，如 HPLC/UV 和 UPLC-ESI-TOF/MS，建立起女贞子药材及其复方制剂的指纹图谱，并分离和鉴别重要的活性成分，将化学信息学和药效学相结合，并进行质量评价和相关研究。

第一部分女贞子药材脂溶性成分和水溶性成分的提取分离

目的：提取女贞子不同部位群，保留不同部位的活性成分。

方法：比较了 100％、75％、50％不同比例的乙醇溶液和不同的提取方法，超声提取法和冷浸提取法；再按照极性差异选用不同的萃取剂分层萃取；将提取样品经合适的 HPLC 条件分析测定，比较共有峰面积和数目，确定合适的前处理方案。

结果：确立了合适的对脂溶性成分和水溶性成分的提取方法：以 75％的乙醇溶液超声提取 2 次，每次 30min；再分别以氯仿和乙酸乙酯为萃取剂分层萃取，挥去萃取剂后，即得到脂溶性成分和水溶性成分。

第二部分女贞子药材 HPLC 指纹图谱研究

目的：建立 HPLC 分析方法，建立女贞子药材的 HPLC 指纹图谱，评价不同产地女贞子药材的质量。

方法：采用高效液相色谱法以 Platisil（铂金）C18ODS (250×4.6mm，5μm)为色谱柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，脂溶性成分的检测波长为 240nm，洗脱程序为：t:0-15-23-33-80min，A％（乙腈比例）:15％-30％-40％-90％-100％;水溶性成分的检测波长为 220nm，洗脱程序为：t：0-25-35-40-60min，A％（乙腈比例）：20％-30％-60％-90％-100％，流速均为 1.0ml·min，柱温为 25℃。

结果：用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离效果较好，达到指纹图谱要求。为更好地控制女贞子的内在质量提供了可靠的分析方法。10 个产地的相似度差异较大，不同产地的女贞子药材水溶性成分指纹图谱相似度均在 0.85 以上，而脂溶性成分指纹图谱相似度则在 0.45～0.93 不等，表明不同产地的女贞子药材之间存在较大差异，而其差异主要体现在脂溶性成分上。运用聚类分析证明产地来源是影响女贞子质量差异的重要因素。其中，江苏地区 GAP 基地的女贞子药材有效成分含量较高，说明在我国推行 GAP 制度对保障中药质量十分重要。

第三部分女贞子药材化学成分

UPLC-ESI-TOF/MS 定性

目的：运用 UPLC-ESI-TOF/MS 技术对中药材女贞子不同部位的主要化学成分进行定性分析。

方法：采用 ESI－TOF/MS 质量检测器,及 UPLC C18色谱柱（100×2.1mm，1.7μm）及 MASS LYNX 系统。条件优化为氮气为雾化、锥孔气；电喷雾电离正离子模式；飞行管检测模式 V 型；毛细管电压 3.2kv；锥孔电压 35v；萃取锥孔 1.0v；源温120℃；脱溶剂气温度 350℃；反向锥孔气流 50l/h；脱溶剂气 600 l/h；；碰撞气流速0.5mL/min；检测器 1700v；扫描时间 0.45s；扫描时间间隔 0.05s; 质荷比范围：50-1000m/z；数据采集形式中心离子化。

结果：找到分子量为 456.6825 和 456.7134 的化合物，经结构确证为齐墩果酸和熊果酸，初步推导了齐墩果酸和熊果酸可能的裂解机理，丰富了五环三萜类化合物的ESI-MSn数据，为其它五环三萜类化合物的鉴定提供了有效的质谱方法。

第四部分复方制剂贞芪扶正胶囊 HPLC 指纹图谱研究

目的：建立 HPLC 分析方法，建立女贞子制剂贞芪扶正胶囊的指纹图谱，评价其质量。

方法：贞芪扶正胶囊采用甲醇溶解过滤法，制得样品浓度为 0.1mg/ml。采用高效液相色谱法以 Platisil（铂金）C18ODS (250×4.6mm，5μm)为色谱柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，洗脱程序为：t：0-12-35-40-50min，A％（乙腈比例）：6％-20％-40％-60％-100％，波长为 236nm，流速为 1.0ml·min，柱温为 25℃。

结果：用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离效果较好，各主要峰分离度大于1.5，达到指纹图谱要求。10 批次的贞芪扶正胶囊样品相似度大于 0.85，证明生产工艺稳定可靠。建立的指纹图谱方法法经方法学验证，操作性强，精密度、重现性、稳定性均好，可用于贞芪扶正胶囊的质量控制。
谱图：

附件：

2.8.rar

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