【极限体验】释放度测定-色谱条件的选择

东风恶

2012/07/18

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色谱柱见下图：
大家知道色谱柱旁边红色的东西是什么吗？

本人较懒惰，照搬我的申报资料了。
3.2.P.5.3.3.1 释放度测定方法学

3.2.P.5.3.3.1.1释放度测定方法的选定

因****在225nm波长附近处有较强的紫外吸收，参照****缓释片质量标准YBH****2005释放度项（HPLC法），采用专属性较高的HPLC法作为本品释放量检测方法。

流动相的选择：

参照****缓释片药品质量标准YBH19**2005和原料药质量标准YBH****2005中流动相体系。

流动相体系

编号	流动相组成体系及试验条件
1	0.2mol/L磷酸二氢钾-0.2mol/L磷酸-乙腈（7:7:5），检测波长225nm。
2	乙腈-甲醇-磷酸溶液（取三乙胺、磷酸各1ml，加水至200ml）（20:30:50），检测波长225nm。
3	乙腈-甲醇-磷酸溶液（取三乙胺、磷酸各1ml，加水至200ml）（10:30:60），检测波长225nm。

备注：流动相1参考****原料药质量标准YBH03**2005；

流动相2和流动相3参考****缓释片药品质量标准YBH****2005。

参照上述流动相体系，进行含量测定流动相选择试验。结果见下表图：

流动相选择试验结果

编号	试验项目	主峰保留时间（min）	主峰面积	拖尾因子	分离度	理论板数	备注
1.	溶剂空白	2.4～3.9	-	-	-	-	-
	空白辅料	2.4～3.9	-	-	-	-	-
	样品	13.417	39258	1.045	29.238	11127
2.	溶剂空白	2.6～3.4,7.3	-	-	-	-	-
	空白辅料	2.6～3.4,7.3	-	-	-	-	-
	样品	4.788	40375	1.047	7.000	7255
3.	溶剂空白	2.7～3.5,5.2	-	-	-	-	-
	空白辅料	2.7～3.5,5.2	-	-	-	-	-
	样品	8.806	40789	0.897	10.244	7257	-

备注：表格中“-”为未统计或无内容，溶剂空白为0.1mol/L盐酸溶液。

试验结果典型色谱图：

编号1.色谱图

备注：色谱图从上至下信息为溶剂空白、空白辅料、样品。

结果表明，****主峰保留时间为13.4分钟，基线漂移较大。
编号2.试验结果（见附件）

原料药供试液色谱图信息

峰#	名称	保留时间	面积	拖尾因子	分离度	理论塔板#	面积%
1	溶剂	2.904	41802	2.187	--	1547	17.347
2	****	4.778	197253	1.189	6.274	3999	81.858
3	杂质	12.854	1914	1.306	18.737	8437	0.794

备注：色谱图从上至下信息为溶剂空白、空白辅料、样品。

试验结果表明，此流动相适合本品释放度测定。
编号3.试验结果（见附件）

原料药供试液色谱图信息

峰#	名称	保留时间	面积	拖尾因子	分离度	理论塔板#	面积%
1		2.782	12183	--	--	1231	4.9129
2		3.054	40872	2.175	1.060	3924	16.4825
3		4.039	2006	--	5.641	10959	0.8090
4		4.162	4724	--	0.470	2043	1.9051
5		9.534	1506	0.745	11.867	5041	0.6073
6	****	32.705	186682	1.018	20.778	5969	75.2832

备注：色谱图从上至下信息为溶剂空白、空白辅料、样品。

试验结果表明，此流动相适合释放度测定。

以上试验结果表明，采用流动相体系为0.2mol/L磷酸二氢钾-0.2mol/L磷酸-乙腈，****
主峰保留时间较迟，基线漂移幅度较大，不利于检测本品低释放量的样品；而采用流动相体系为乙腈-甲醇-磷酸溶液（取三乙胺、磷酸各1ml，加水至200ml）（10:30:60），****主峰保留时间在约8分钟，基线较为平稳，更适合本品释放量的测定。

3.2.P.5.3.3.1.2辅料和释放介质干扰试验（色谱图见附件20）

（1）、试验方法与具体步骤：

①溶出介质为水干扰试验

溶剂空白：水；

辅料空白；精密称取辅料0.1388g，置于200ml量瓶中，加水适量振摇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过；

样品供试液：精密称取本品（规格：0.2mg，批号：20120401）0.1405g，置于200ml量瓶中，加水适量振摇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。

②溶出介质为0.1mol/L盐酸溶液干扰试验

溶剂空白：0.1mol/L盐酸溶液；

辅料空白；精密称取辅料0.1392g，置于200ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液适量振摇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过；

样品供试液：精密称取本品（规格：0.2mg，批号：20120401）0.1410g，置于200ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液适量振摇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。

③溶出介质为pH4.5醋酸-醋酸钠溶液干扰试验

溶剂空白：pH4.5醋酸-醋酸钠溶液；

辅料空白；精密称取辅料0.1392g，置于200ml量瓶中，加pH4.5醋酸-醋酸钠溶液适量振摇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过；

样品供试液：精密称取本品（规格：0.2mg，批号：20120401）0.1410g，置于200ml量瓶中，加pH4.5醋酸-醋酸钠溶液适量振摇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。

④溶出介质为pH7.0磷酸盐缓冲液干扰试验

溶剂空白：pH7.0磷酸盐缓冲液；

辅料空白；精密称取辅料0.1380g，置于200ml量瓶中，加pH4.5醋酸-醋酸钠溶液适量振摇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过；

样品供试液：精密称取本品（规格：0.2mg，批号：20120401）0.1405g，置于200ml量瓶中，加pH7.0磷酸盐缓冲液适量振摇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。

精密量取以上溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

（2）、试验结果见下图。