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液相色谱仪常见故障及处理方法简析

hnflyd

2012/08/16

液相色谱（LC）

1、液相色谱仪—气泡溢出

流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0～3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。

2、液相色谱仪—柱压高原因

(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;

(2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

3、液相色谱仪—既无压力指示,又无液体流过

(1)泵密封垫圈磨损;

(2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。

4、液相色谱仪—压力波动大,流量不稳定

原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

5、液相色谱仪—出峰不佳,峰分叉

(1)色谱柱被污染;

(2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。

6、液相色谱仪—峰面积重复性不佳

(1)进样阀漏液;

(2)加样针不到位。

(3)液量不足.

处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要,如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。

分
该帖子已被版主-zhaohua8011加3积分，加2经验;加分理由:鼓励

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jiaodandan

第1楼2012/08/16

谢谢楼主分享！

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武灵

第2楼2012/08/16

总结的很不错。如果图文并茂就更好了。

0

xiaowang268

第3楼2012/08/16

同意楼上的！

0

影子

第4楼2012/08/16

如果用乙腈水作流动相时既无压力指示，又无液体流过，其它所有都不变，只是换成甲醇水作流动相时压力正常，这个是属于什么故障？如何解决？
hnflyd(hnflyd) 发表: 3、液相色谱仪—既无压力指示,又无液体流过

(1)泵密封垫圈磨损;

(2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。

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zhaohua8011

第5楼2012/08/17

总结得很不错，较全面

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trees83

第6楼2012/08/17

可能是单向阀的问题，单向阀中红宝石球用乙腈是会连粘，卸下，再安上或水中超声一下再安上就好了。
影子(hyheying) 发表:如果用乙腈水作流动相时既无压力指示，又无液体流过，其它所有都不变，只是换成甲醇水作流动相时压力正常，这个是属于什么故障？如何解决？

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houjjun

第7楼2012/08/19

有道理
trees83(trees83) 发表:可能是单向阀的问题，单向阀中红宝石球用乙腈是会连粘，卸下，再安上或水中超声一下再安上就好了。

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小虾米

第8楼2012/11/04

介绍的很到位！！

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houjjun

第9楼2012/11/04

介绍的很好，大力支持

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三人行

第10楼2012/11/04

什么类型的色谱柱，能用纯水反向冲洗柱子？
hnflyd(hnflyd) 发表: 5、液相色谱仪—出峰不佳,峰分叉

(1)色谱柱被污染;

(2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。

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