省部重点实验室
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二、抗体种属来源的选择:
有人认为单抗比多抗好,其实这并不是一个严谨的观点,只能说在可能性上单抗的特异性更好一些,而多抗的亲和力会优于单抗,并且特异性并不一定就逊于单抗,主要看抗原的设计水平。目前商品化抗体里单抗主要是鼠单抗、兔单抗,多抗主要是兔多抗、山羊多抗等,其他种属来源抗体较少。不建议纠结于单抗好还是多抗好,能做出实验的抗体就是好抗体。
在选择上一般建议实验种属和抗体种属亲缘性越远越好,不宜同源。抗体不同种属会要影响接下来二抗的选配。特别是在免疫荧光双标实验中,需要在区别于实验种属的基础上,区分开两个指标的抗体种属来源,以便于二抗区别识别。
三、关于性价比的选择:
抗体的品质高低最终还是需要通过实验结果来呈现的,但是在选择抗体之前我们并无法准确判断抗体的效果如何。无论什么品牌的,无论进口还是国产的,都会有用得不错的产品,也都会有做不出来的产品。抗体属于异质化产品,不同品牌之间,甚至同一品牌的不同产品之间,抗体品质差异都较为明显,而且没有统一的衡量标准。这是抗体选择中最难的一个问题。很多人习惯于根据实验室传统意识或参考文献上使用的产品进行选择,但是因为不同批次间的抗体效果也是有差异的,所以并不能完全确保正确选择。在这种情况下,抗体的售后就尤为重要,遇到抗体品质障碍时,能够确保有效地解决问题,不至于影响实验的进展。现在有部分品牌可以提供免费的抗体小样的,无疑对这个问题是一个很好的解决方案。先确定抗体是否适合自己的实验,可以避免因为抗体质量投诉耽误实验安排。
在价格方面,需要谨记,最贵的不一定就是最好的,最适合你的实验的才是最好的。花很多钱买到很贵的抗体,再花上很长的时间去投诉的情况并不少见。只买对的,不买贵的。在选择价格的时候还要注意规格大小、抗体浓度、效价范围等,要综合考虑。在规格方面,根据最终可以稀释成的工作液的量的来衡量更为准确。很多老品牌提供的抗体产品基本都是以大包装为主,就单个课题的实验而言,过大的包装有时会造成很大的浪费。目前Proteintech、Bioworld、Cell Signal等品牌都相继推出小包装的抗体,这在一定程度上给选择者更大的选择自由度,可以根据使用产品的效价,计算出自己实际需要的抗体量,做到精确定量采购。
四、关于品牌的选择:
因为抗体品质的异质化,关于抗体的品牌选择就被大家所重视,但是不管是什么品牌都难免会遇到不适合自己实验的抗体。所以一般建议考虑那些业内普遍认可、购买方便、技术支持专业、售后处理便捷的品牌。一些甚至都没有正式代理的,只能备选。同时购买时一定要找能够提供产品指导、实验分析、售后处理的正规代理商购买,避免因为买到假货水货影响实验。
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五、关于其他一些小细节:
抗体选择与使用过程中,多少还会遇到一些意想不到的事情。有些细节,还是需要多注意一些。如在选择做阻断或中和实验时,有时需要将抗体加到细胞培养液中,这是需要注意抗体是否含有叠氮钠。如果是大包装的抗体,进行分装是比较节约的方式,如果是高效价的,可以配成母液再分装。抗体的短时间运输,用普通冰块保持温度是可以满足要求的。
另外不要纠结于WB过程中分子量的问题。很多时候,我们看到同样的抗体,不同的品牌,甚至同一品牌不同的货号,标注的分子量都不一样。其实可能只是生产商只检测时使用了不同的种属不同的样品类型,或是参照了不同的文献,对使用者来说,同样的样品,不管使用哪个品牌的,只要抗体是对的,目的条带只会出现在相同的位置。关于分子量的问题,一般不建议看产品说明,WB中条带的位置由样品决定,并不会因为抗体不同而不同。所以在检测蛋白之前,我们可以通过数据库或参考文献,对将要检测的蛋白做个比较全面的了解,包括其可能剪切与修饰的情况、表型的情况等。在第一次使用一个新的抗体时,不要根据分子量横向剪膜,可以保留几个全泳道,看看条带位置或分布的情况。