植物蛋白提取方法

四、植物材料：水稻苗，叶鞘，根
　　1、200毫克样品置于冰上磨碎
　　2、加lysis buffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清
　　3、重复离心5min
　　lysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40
　　
　　五、蛋白质样品制备
　　秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等（1986）的方法进行。
　　100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5 ml 10% 三氯乙酸（丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇），混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000 r/min离心15 min，弃上清，沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，（有必要再用80％丙酮(含10 mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。
　　按每mg干粉加入20μl（可调） UKS液[9.5 M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2% Ampholine (Amersham Pharmacia Biotech Inc，pH3.5-10)，6% Triton X-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度（温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰）16000 r/min离心15 min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。或者-70度保存
　　
　　六、植物根中蛋白质的抽取
　　(1) sample, 液氮研磨
　　(2) 装1.5 ml centrifuge 用tube
　　(3) 加 1M KH2PO4 K2HPO4 700 ul
　　(4) 12000 rpm, 4度, 10-15minite
　　(5) 取上层液，蛋白质就在里面