测定这些需要那些耗材？

哈哈，这可是月旭滴一个好机会撒，做样品需要标准，需要色谱柱子等撒，价值不菲哈

多功能柱净化柱和免疫亲和柱子都很贵撒，而且是一次性使用滴，相信厂商会抓住机遇滴

感谢版友的对月旭公司的关注，以下是我们的乳制品中黄曲霉毒素的解决方案，具体报价什么的，可以具体沟通。另附上两个标准方法



1. 试用范围

牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等乳制品

2. 方法原理

黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂，因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取，对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化，荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。

3. 所需设备和耗材

黄曲霉毒素免疫亲和柱：Welchrom^® IAC (1ml，25支/盒；3ml，15支/盒)（上海月旭提供）；

高效液相装置带荧光检测器；

均质机；

水平振荡器；

SPE转接头及50ml大容量上样器：Welchrom^® SPE Adapter（上海月旭提供）；

分析天平（精度0.02 g)；

SPE装置带抽真空系统：Welchrom^® SPE Device（上海月旭提供）；

黄曲霉毒素M1标准品；

PBS 缓冲溶液：称取1.16 g Na2HPO4，0.20 g KH₂PO₄，8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中，用HCL或NaOH调节pH至7.4，然后定容至1000ml；

甲醇（色谱纯）；

乙腈（色谱纯）；

正己烷（分析纯）。

4. 样品前处理

• 牛奶样品

称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品，置于50 mL具塞离心管中，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化；

• 发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)

称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品，用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4，9500r/min下均质5 min，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化。

• 乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品

称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 mL烧杯中，加入50 mL约50 ℃的水于乳粉中，玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室温，移入100 mL容量瓶中，水洗烧杯并转移洗涤液，用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min，混合上清液，取50mL上清液待净化。

• 干酪

切取均质的样品5g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇，9500 r/min下匀浆5 min，超声提取30 min，6000r/min下离心10 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中，同时加入30 mL正己烷，振摇2 min，分层后，弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2 mL，转移浓缩液至离心管，烧瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗涤并倒入50 mL离心管中，加PBS溶液稀释至50 mL，6000r/min下离心5 min，上清液待净化。

• 奶油

称取5g(精确至0.01 g)试样，置于50 mL烧杯中，用20 mL正己烷将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中，待分层后，将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中，旋转蒸发仪减压浓缩至约5 mL，加PBS稀释至约50mL，待净化。


5. 免疫亲和柱净化（3cc）

• 将IAC装于固相萃取装置上，接上大体积上样器，10ml PBS溶液活化柱子，流速保持在2–3 ml/min，确保上样前柱子保留少量（0.5ml）的PBS溶液，活化液不收集；
• 将待净化液加入免疫亲和柱，流速不超过5 mL/min，不收集流出液；
• 用约20ml去离子水淋洗柱子，流速不超过5 mL/min，抽真空1分钟，不收集流出液；
• 用1.5ml甲醇洗脱，流速控制在1d/s，收集洗脱液过膜后上机测试。

注：免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用

6. 色谱条件：

色谱柱： Ultimate^® XB-C18 250 mm x 4.6 mm，5µm（上海月旭提供）

预柱： Ultimate^® C18，5µm，ULT5BG18（上海月旭提供）

流动相： 水:甲醇:乙腈=11:4:5

柱温： 35℃

检测波长： 发射波长：365nm，激发波长：450nm

进样量： 100µL

附：测试谱图

马哥现在又做采购？

用HPLC测定安赛蜜、糖精钠，用好点的常用规格C18柱就可以；

标准品建议买色谱科或者德国DR的，前处理用乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白，针式过滤器过滤，按摸索好的条件走就好了。

黄曲霉毒素的检测，无论B1、B2、G1、G2 还是M1，个人感觉免疫亲和柱是最佳选择，别的什么黄曲霉专用柱，多功能净化柱在简单基质的样品处理时还行，在处理辣椒、浸膏等复杂基质时还是免疫亲和柱最好用；

值得注意的是，黄曲霉毒素B1和G1本来具有较强的荧光性，但接触水以后，发生荧光的淬灭现象，荧光性基本消失，很难用液相色谱检测出来，需要衍生，个人感觉柱后衍生器比较好用

谢谢老师啊，很专业，现在需要采购耗材，按照您的意思黄曲霉全部采购免疫亲和柱吧？？

马哥这些项目没做过?

主要是黄曲霉毒素的免疫亲和柱，实际上就是SPE柱。大家说的都比较全面，目前衍生比较推荐的光化学衍生。

免疫亲和柱很贵滴哈，如果楼主做滴多，那么代价相当滴大