【极限体验】头孢地尼分散片有关物质摸索

东风恶

2013/02/28

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有关物质检查方法参照USP-34：

有关物质 取装量差异项下的细粉适量（相当于头孢地尼75mg），置50ml量瓶中，加0.1mol/L磷酸缓冲液[0.1mol/L磷酸氢二钠溶液-0.1mol/L磷酸二氢钾(2:1)]30ml溶解，并用0.1%四甲基氢氧化铵溶液稀释至刻度，制成每1ml约含头孢地尼1.5mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取头孢地尼对照品适量，加0.1mol/L磷酸缓冲液溶解并定量稀释制成每1ml中约含头孢地尼0.75mg的溶液，精密量取适量，加0.1%四甲基氢氧化铵溶液并定量稀释至每1ml约含头孢地尼15μg的对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010版二部附录V D）测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（粒径：5um，规格:4.6mm×250mm）；流动相A为0.1%四甲基氢氧化铵溶液（用磷酸调节pH值至5.5）1000ml，加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.4ml，流动相B为0.1%四甲基氢氧化铵溶液（用磷酸调节pH值至5.5）-乙腈-甲醇（500：300：200），加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.4ml；按表Ⅰ进行线性梯度洗脱。柱温为40℃，检测波长为254nm。精密称取头孢地尼对照品约37.5mg，置25ml量瓶中，加0.1mol/L磷酸缓冲液10ml溶解，并加入头孢地尼杂质A对照品溶液（取头孢地尼杂质A对照品适量，加0.1%四甲基氢氧化铵溶液溶解并稀释制成每1ml含0.04mg的溶液）5.0ml、头孢地尼杂质B对照品溶液（取头孢地尼杂质B对照品适量，加0.1%四甲基氢氧化铵溶液溶解并稀释制成每1ml含0.04mg的溶液）5.0ml，用0.1%四甲基氢氧化铵溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适应性溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；头孢地尼峰保留时间约为20分钟，头孢地尼杂质A有四个峰，相对头孢地尼主峰保留时间分别约为0.85、0.94、1.11和1.14；头孢地尼杂质B峰相对头孢地尼主峰保留时间约为1.28；头孢地尼峰与头孢地尼杂质A第三个峰之间的分离度应不小于1.5；头孢地尼杂质B峰的拖尾因子不大于1.5。取对照品溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，均采用以下公式按外标法以峰面积计算，杂质的限度见表Ⅱ。（供试品溶液中任何小于头孢地尼对照品溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计）。

表Ⅰ

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	95	5
2	95	5
22	75	25
32	50	50
37	50	50
38	95	5
48	95	5

杂质的含量采用以下公式计算：

（r_U/r_S）×（Cs/C_U）×（100/F）

Cs为头孢地尼对照品溶液中头孢地尼的浓度（mg/ml）；

C_U为供试溶液中头孢地尼的浓度（mg/ml）；

r_U为供试溶液中杂质峰面积；

r_S为头孢地尼对照品溶液中头孢地尼峰面积；

F为表Ⅱ中各杂质的相对响应因子；

表Ⅱ

有关物质	相对保留时间	相对响应因子	限值（%）
杂质Ⅷ	0.10	1.1	不得过0.5
杂质Ⅳ	0.13	1.1	不得过0.5
杂质Ⅴ	0.46	1.5	不得过0.7
杂质B	0.77	1.0	不得过0.3
杂质Ⅺ	0.75	1.0	不得过0.7
头孢地尼杂质A（内酰胺内酯断裂-a）	0.85	1.5	不得过2.5
头孢地尼杂质A（内酰胺内酯断裂-b）	0.94	1.5
头孢地尼杂质A（内酰胺内酯断裂-C）	1.11	1.5
头孢地尼杂质A（内酰胺内酯断裂-d）	1.14	1.5
杂质I	1.23	1.2	不得过1.0
头孢地尼杂质B	1.28	1.1	不得过0.2
杂质ⅩⅢ	1.37	1.4	不得过0.5
杂质E	1.44	1.0	不得过0.5
杂质Ⅶ（E异构体）	1.5	1.1	不得过0.7
杂质Ⅲ	1.6	1.3	不得过1.0
杂质D	1.82	1.0	不得过0.2
未知杂质	-	1.0	不得过0.2
总杂质	-	-	不得过5.0

色谱柱信息：序列号（SN）：W11212195。

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东风恶

第1楼2013/02/28

系统适用性试验情况：

进样精密度试验：

供试液和空白溶剂：

供试液色谱图情况：

供试液色谱图放大：

主峰（头孢地尼）前第三和第二为杂质A中的A-1和A-2，后第一和第二为杂质A-3和A-4,主峰第三为杂质B.

摸索情况：

由于本杂质定位为以相对保留时间根据，在要求试验环境、色谱柱和液相设备性能有很高的要求，在进行试验时，为保证试验的可重复性，最好控制试验环境、色谱柱和液相色谱仪最好一致，不然会有一定的影响。

东风恶(luoleqc) 发表:有关物质检查方法参照USP-34：

有关物质 取装量差异项下的细粉适量（相当于头孢地尼75mg），置50ml量瓶中，加0.1mol/L磷酸缓冲液[0.1mol/L磷酸氢二钠溶液-0.1mol/L磷酸二氢钾(2:1)]30ml溶解，并用0.1%四甲基氢氧化铵溶液稀释至刻度，制成每1ml约含头孢地尼1.5mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取头孢地尼对照品适量，加0.1mol/L磷酸缓冲液溶解并定量稀释制成每1ml中约含头孢地尼0.75mg的溶液，精密量取适量，加0.1%四甲基氢氧化铵溶液并定量稀释至每1ml约含头孢地尼15μg的对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010版二部附录V D）测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（粒径：5um，规格:4.6mm×250mm）；流动相A为0.1%四甲基氢氧化铵溶液（用磷酸调节pH值至5.5）1000ml，加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.4ml，流动相B为0.1%四甲基氢氧化铵溶液（用磷酸调节pH值至5.5）-乙腈-甲醇（500：300：200），加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.4ml；按表Ⅰ进行线性梯度洗脱。柱温为40℃，检测波长为254nm。精密称取头孢地尼对照品约37.5mg，置25ml量瓶中，加0.1mol/L磷酸缓冲液10ml溶解，并加入头孢地尼杂质A对照品溶液（取头孢地尼杂质A对照品适量，加0.1%四甲基氢氧化铵溶液溶解并稀释制成每1ml含0.04mg的溶液）5.0ml、头孢地尼杂质B对照品溶液（取头孢地尼杂质B对照品适量，加0.1%四甲基氢氧化铵溶液溶解并稀释制成每1ml含0.04mg的溶液）5.0ml，用0.1%四甲基氢氧化铵溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适应性溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；头孢地尼峰保留时间约为20分钟，头孢地尼杂质A有四个峰，相对头孢地尼主峰保留时间分别约为0.85、0.94、1.11和1.14；头孢地尼杂质B峰相对头孢地尼主峰保留时间约为1.28；头孢地尼峰与头孢地尼杂质A第三个峰之间的分离度应不小于1.5；头孢地尼杂质B峰的拖尾因子不大于1.5。取对照品溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，均采用以下公式按外标法以峰面积计算，杂质的限度见表Ⅱ。（供试品溶液中任何小于头孢地尼对照品溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计）。

表Ⅰ

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	95	5
2	95	5
22	75	25
32	50	50
37	50	50
38	95	5
48	95	5

有关物质	相对保留时间	相对响应因子	限值（%）
杂质Ⅷ	0.10	1.1	不得过0.5
杂质Ⅳ	0.13	1.1	不得过0.5
杂质Ⅴ	0.46	1.5	不得过0.7
杂质B	0.77	1.0	不得过0.3
杂质Ⅺ	0.75	1.0	不得过0.7
头孢地尼杂质A（内酰胺内酯断裂-a）	0.85	1.5	不得过2.5
头孢地尼杂质A（内酰胺内酯断裂-b）	0.94	1.5
头孢地尼杂质A（内酰胺内酯断裂-C）	1.11	1.5
头孢地尼杂质A（内酰胺内酯断裂-d）	1.14	1.5
杂质I	1.23	1.2	不得过1.0
头孢地尼杂质B	1.28	1.1	不得过0.2
杂质ⅩⅢ	1.37	1.4	不得过0.5
杂质E	1.44	1.0	不得过0.5
杂质Ⅶ（E异构体）	1.5	1.1	不得过0.7
杂质Ⅲ	1.6	1.3	不得过1.0
杂质D	1.82	1.0	不得过0.2
未知杂质	-	1.0	不得过0.2
总杂质	-	-	不得过5.0

色谱柱信息：序列号（SN）：W11212195。

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samanthalas

第2楼2013/03/01

不错！
头孢地尼我们以前也做过，不过用的是极限系列的ＸＢ－Ｃ１８柱，楼主用的是优谱系列的Ｃ１８柱，　出峰时间差不多唉．
但是杂质情况不太一样，我们那时做得可能不是分散片．

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fengmo4668

第3楼2013/03/01

哇，已知杂质都有这么多啊！这个色谱方法还真是强大！

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fengmo4668

第4楼2013/03/01

方法是你们自己开发的吗？

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东风恶

第5楼2013/03/02

我们主要参照的是USP-34版的方法。
fengmo4668(fengmo4668) 发表:方法是你们自己开发的吗？

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fengmo4668

第6楼2013/03/02

哦。34还是比较新的。不过好像35已经出版了，不知道你找到电子版的没有？

找到了的话，别忘了共享一下哦!
东风恶(luoleqc) 发表:我们主要参照的是USP-34版的方法。

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东风恶

第7楼2013/03/04

我一定共享资源。
fengmo4668(fengmo4668) 发表:哦。34还是比较新的。不过好像35已经出版了，不知道你找到电子版的没有？

找到了的话，别忘了共享一下哦!

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东风恶

第8楼2013/03/05

一般中国药典2010年版二部没有这么复杂，这个品种是我们把标准向USP看齐，稍微提高了些，这个品种的关键点是分离度和各个色谱峰的相对保留时间的重现性。
samanthalas(samanthalas) 发表:不错！
头孢地尼我们以前也做过，不过用的是极限系列的ＸＢ－Ｃ１８柱，楼主用的是优谱系列的Ｃ１８柱，　出峰时间差不多唉．
但是杂质情况不太一样，我们那时做得可能不是分散片．