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固相萃取前体积及固相萃取问题！

penglin1984

2013/03/05

前处理综合讨论

1、体积问题

2g空白组织+100uL标准品溶液（40ug/mL），加10mL磷酸盐缓冲液提取，离心后取上清。离心后的残渣再加入10mL磷酸缓冲液提取，离心后取上清。合并两次上清液。

现在要弄明白的问题是：这个合并后的上清液中药物的理论浓度应该是多少？

2、回收率低的问题

如果合并后的上清液体积按20mL计算，理论药物浓度为4ug/20mL，即为0.2ug/mL。按这个浓度计算回收率，上清液不过固相萃取柱时的回收率为85%以上。过完固相萃取柱以后，回收率只有40%。这是什么原因呢？固相萃取柱的问题？

我用标准品溶液过固相萃取柱考察过回收率的情况，结果按照正常活化---平衡---上样---淋洗---洗脱程序，回收率大于80%。

考察过不同品牌的固相萃取柱，国产艾杰尔和岛津的C18柱，回收率都不理想。有人建议换更大容量的小柱。更换容量对于回收率改善有没有用？如果没有改善，那有什么更好的建议么？

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ff2012

第1楼2013/03/12

如果暂时不想换大规格的柱子试验，可以对上样流出液，淋洗液分别进行检测，如果上样流出液中有目标物，那么有俩种可能，1是柱子规格过小，导致样品穿透，2是柱子对目标物的保留不好，如上样流出液没有目标物，说明柱子对目标物保留很好，也不需要换大规格的柱子，再看淋洗时候的流出液，若此时有流出，可以考虑换下淋洗液，如也没有，那就是柱子本身对目标物吸附力较大，应该换下洗脱液。

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