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关于CE分离的几个疑问?

毛细管电泳(CE)

  • 最近在用CE对丹氨酸类进行手型拆分,主要是以下几种,

    苯丙氨酸 Dns-phe 苏氨酸 Dns-Thr 蛋氨酸 Dns-Met 丙氨酸 Dns-Ala

    丝氨酸 Dns-Ser 正頡氨酸 Dns-Nva 亮氨酸 Dns-Leu 色氨酸 Dns-Trp

    选的磷酸体系缓冲液,pH6.0, 50ppm,拆分剂是正电型化合物,选用的5mM

    但不知道为什么连样品峰都没有,更不要说是拆分了。。。刚看到版主在讨论丹氨酸类的分析(PH与PI类),所以,发帖子求问

    第一次发帖,勿拍。。。
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  • 老多_小多

    第1楼2013/03/15

    第一发帖,更加要多拍,不然怎么能引起关注呢,呵呵
    楼主是完全不出峰吗

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  • 该帖子已被版主-nini2006加5积分,加2经验;加分理由:那就多带领大家一起来拍吧,哈哈
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  • hxlyy

    第2楼2013/03/15

    恩,基线,电流都很稳,EOF也正常,就是没有出峰。。。不知道为什么

    老多_小多(emoc98311) 发表:第一发帖,更加要多拍,不然怎么能引起关注呢,呵呵
    楼主是完全不出峰吗

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  • beyond1977

    第3楼2013/03/15

    应助达人

    这块没接触过,你可以问问nini版主,看了nini版主的帖子,会不会是你的ph太低了,导致这些组分还没出来,或许你可以加0.2psi的压力辅助分离看看

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  • nini2006

    第4楼2013/03/15

    好厉害呀,我发的哪个帖子让你觉得是因为pH值低的缘故啊?我一点印象都木有了。

    beyond1977(xsh6743) 发表:这块没接触过,你可以问问nini版主,看了nini版主的帖子,会不会是你的ph太低了,导致这些组分还没出来,或许你可以加0.2psi的压力辅助分离看看

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  • nini2006

    第5楼2013/03/15

    1、beyond斑竹说的没错,估计是pH值的缘故。提高pH值到9.0以上看看;

    2、 另外,波长要选择好,Dns-AAs的吸收波长在214 -254nm;

    3、选择电动进样;

    4、这些物质都是在EOF之后出峰的,耐心点等待让它走1 h看会不会出来。

    5、曾见过一篇分离Dns-AAs的paper,人家用的BGE浓度很低:20 mM NH4Ac,然后pH是5.0,手性selector是Cu(II)-complex,电压才13.6 kV。

    仅供参考~

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  • hxlyy

    第6楼2013/03/15

    我选的吸收波长是214nm,BGE浓度是50mM,电压是15kv...这些好像都差不多。。。另外,不是说pH要低于酸的解离值的吗?这样氨基酸才能电离?(不太懂,所以看到版主的那篇就想问问,谢谢啊)

    nini2006(nini2006) 发表:1、beyond斑竹说的没错,估计是pH值的缘故。提高pH值到9.0以上看看;

    2、 另外,波长要选择好,Dns-AAs的吸收波长在214 -254nm;

    3、选择电动进样;

    4、这些物质都是在EOF之后出峰的,耐心点等待让它走1 h看会不会出来。

    5、曾见过一篇分离Dns-AAs的paper,人家用的BGE浓度很低:20 mM NH4Ac,然后pH是5.0,手性selector是Cu(II)-complex,电压才13.6 kV。

    仅供参考~

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  • nini2006

    第7楼2013/03/15

    对于羧基,pH高于pKa羧基才能解离,而氨基的解离则相反,pH要低于pKb才能解离。

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  • hxlyy

    第8楼2013/03/15

    另外,我的EOF值一般都是要在25min...我BGE也未添加任何有机溶剂,是溶液粘度太大的原因?

    不甚感激啊

    nini2006(nini2006) 发表:1、beyond斑竹说的没错,估计是pH值的缘故。提高pH值到9.0以上看看;

    2、 另外,波长要选择好,Dns-AAs的吸收波长在214 -254nm;

    3、选择电动进样;

    4、这些物质都是在EOF之后出峰的,耐心点等待让它走1 h看会不会出来。

    5、曾见过一篇分离Dns-AAs的paper,人家用的BGE浓度很低:20 mM NH4Ac,然后pH是5.0,手性selector是Cu(II)-complex,电压才13.6 kV。

    仅供参考~

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  • nini2006

    第9楼2013/03/15

    同样浓度下,磷酸盐的离子强度比NH4Ac要大,所以EOF会比NH4Ac体系的要慢。25 min,真是有点慢了。如果必须要这个浓度的话,你可以提高电压。根据我的经验,你这个浓度,电压上到25、27 kV应该都不会有问题的。另外,你一针跑了多长时间?

    hxlyy(v2672048) 发表:另外,我的EOF值一般都是要在25min...我BGE也未添加任何有机溶剂,是溶液粘度太大的原因?

    不甚感激啊

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  • nini2006

    第10楼2013/03/15

    关于预测出峰顺序的那个帖子,我做了点说明,希望大家再看看。不要被误导了才好啊。
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130219/4574102/

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