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液相换了新预柱和色谱柱，第二天就出问题了，大家帮帮忙！！！急急急……

fannis

2013/04/14

液相色谱（LC）

刚买的C18亲水新柱子，第一天跑样很正常，纯甲0.2流速1.18MPa，1流速5.90MPa，很正常。跑了大概10个样，进样前都是经过了滤膜的，关机器，第二天来的时候，用纯甲醇走，1流速柱压7.08，这个还在正常范围内吧，新柱子用了下柱压高了一点还能接受，梯度以80%甲醇50甲醇，这个时候中途离开了一下，柱压飙到22MPa，我滴个神，这可是刚买的柱子啊，要是再出问题导师还不弄死我，取下色谱柱后（预柱未取下）纯甲醇1流速柱压6.多，但是这样跑了几分钟后柱压神奇般的又降下来了，到了1.多，等装上柱子后，晕0.2、0.4、0.6、0.8、1.0柱压分别为1.4、2.8、5.4、7.8和12.多，这个压力完全不正常。
今天又冲了一天柱子，情况差不多，甲醇的时候柱压还可以，过度到水期间柱压高很多，将近20mpa（流速一直1ml/min），纯水时16.多mpa，取下色谱柱后（预柱未取下）和昨天一样的情况刚开始压力6点多，紧接着压力很快就将下来了，到1.多，这个机器到底是怎么个情况呢？？

每天溶液基本上都过滤超声，最多也就是两天换一次，跑液相这三个来星期基本上都是在处理这机器了，期间换了好像5个预柱，我绰号都叫“预柱杀手”，有时候我都还没进样呢，只是冲柱子压力就飙高，就要换预柱了，而且实验室平均一年要换好几根柱子，这是我们操作不当吗，我是研一还是新手，大神们能不能帮帮小弟呀呀，跑了液相心力交瘁……

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houjjun

第1楼2013/04/14

这个肯定是液路有堵塞的地方,一般两个问题,
1.确定是色谱柱的压力高了吗?有没有可能是液路中的某一个地方堵塞造成的压力上升
2.色谱柱的筛板堵塞,进液口的,拆下来清洗吧

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fannis

第3楼2013/04/14

我用1ml/min流速走纯水，17MPa,不接色谱柱的话是7.多，柱子可能稍微有那么一点堵我感觉，预柱和色谱柱都不接的话大概压力在0.5左右，前两天维修人员已经来清理过了，当时记得只有0.05，现在0.5，哎，也有点升高了，现在总是接二连三的换预柱，总觉得有问题，但是又不知道，这个月换了5个预柱，一根柱子，现在想就是想早点结束啊，有点苦逼
houjjun(houjjun) 发表:这个肯定是液路有堵塞的地方,一般两个问题,
1.确定是色谱柱的压力高了吗?有没有可能是液路中的某一个地方堵塞造成的压力上升
2.色谱柱的筛板堵塞,进液口的,拆下来清洗吧

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三人行

第4楼2013/04/14

流动相中有缓冲盐吗，浓度是多少？

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remioromen

第5楼2013/04/15

楼主是做中药的吗？
fannis(v2699022) 发表: 刚买的C18亲水新柱子，第一天跑样很正常，纯甲0.2流速1.18MPa，1流速5.90MPa，很正常。跑了大概10个样，进样前都是经过了滤膜的，关机器，第二天来的时候，用纯甲醇走，1流速柱压7.08，这个还在正常范围内吧，新柱子用了下柱压高了一点还能接受，梯度以80%甲醇50甲醇，这个时候中途离开了一下，柱压飙到22MPa，我滴个神，这可是刚买的柱子啊，要是再出问题导师还不弄死我，取下色谱柱后（预柱未取下）纯甲醇1流速柱压6.多，但是这样跑了几分钟后柱压神奇般的又降下来了，到了1.多，等装上柱子后，晕0.2、0.4、0.6、0.8、1.0柱压分别为1.4、2.8、5.4、7.8和12.多，这个压力完全不正常。
今天又冲了一天柱子，情况差不多，甲醇的时候柱压还可以，过度到水期间柱压高很多，将近20mpa（流速一直1ml/min），纯水时16.多mpa，取下色谱柱后（预柱未取下）和昨天一样的情况刚开始压力6点多，紧接着压力很快就将下来了，到1.多，这个机器到底是怎么个情况呢？？

每天溶液基本上都过滤超声，最多也就是两天换一次，跑液相这三个来星期基本上都是在处理这机器了，期间换了好像5个预柱，我绰号都叫“预柱杀手”，有时候我都还没进样呢，只是冲柱子压力就飙高，就要换预柱了，而且实验室平均一年要换好几根柱子，这是我们操作不当吗，我是研一还是新手，大神们能不能帮帮小弟呀呀，跑了液相心力交瘁……

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fannis

第6楼2013/04/16

磷酸盐，0.05M

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fannis

第7楼2013/04/16

不是，怎么这么问？是不是觉得太浪费柱子了

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elflame

第10楼2013/04/16

一因为甲醇：水（50:50）时的粘度系数最高，所以此时的压力是甲醇水体系最高的。

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fannis

第11楼2013/04/18

这个是知道的，只是磷酸盐跑着跑着压力就升高了，我感觉是预柱跑磷酸盐压力升高，这是因为预柱堵了呢，还是预柱也有亲水不亲水之分，因为我用的这个不是亲水性的预柱，所以很容易就给堵额，一般3天，预柱压力就猛增了
elflame(v2676787) 发表:一因为甲醇：水（50:50）时的粘度系数最高，所以此时的压力是甲醇水体系最高的。

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fannis

第12楼2013/04/18

是不是因为用柱子太狠了？？
remioromen(remioromen) 发表:楼主是做中药的吗？

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yzulcl

第13楼2013/04/18

应助达人

看起来像是预柱的上游有颗粒之类的东西在流路里面，所以刚换上新预柱的时候压力正常；跑一段时间预柱就被颗粒堵了。

从流动相开始一个一个检查清洗试试吧：流动相在使用之前过滤膜了吗？溶剂瓶里面的滤头是不是该清洗或更换？泵的柱塞杆密封圈有磨损掉碎屑吗？进样六通阀是不是脏了呢？总之该洗的洗该换的换看看吧。

还有一个低级错误你有没有犯：流动相里面含有盐（比如磷酸盐），用完了直接用甲醇冲洗会导致盐析出，从而堵柱子。反过来，柱子里面原来是用的100%甲醇，直接用含有磷酸盐的流动相冲洗平衡也有可能导致盐析出。盐析出的位置很多：管路里面、泵腔里面、比例阀（如果是四元的）里面、色谱柱里面……正确的做法是用不含盐的并且至少含有50%的水的流动相冲洗过渡。

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