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“色”路蹒跚,从迷失中走来,记某品种的检测方法的摸索过程

厂商论坛

  • 此篇,继前篇“色谱“黑洞”,某品种有关物质分析摸索”后续研究摸索。
    研究结论为,本品中提及的杂质A和杂质B是该品的同分异构体,其中杂质A和该品的极性很类似(邻间关系),极难分开,以前的流动相洗脱能力有限,易残留在色谱柱上,需要加大流动相中的乙腈比例,以该流动相作为流动相A,以70%的乙腈作为流动相B,AB比例为80:20才能有效的洗脱出,即下图。咨询了很多同行以及代理商的技术老师,该品在欧洲药典上有收载,因选用特殊色谱柱来进行有关物质的研究。
    色谱柱信息:苯基柱Ultimate XB-Phenyl SN:241301533,LN:2401.11
    色谱条件:USP35 NF30收载:苯基柱,流动相为甲醇-乙腈-缓冲液(2.7g/L磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值为3.0±0.2)(3:1:6),4.6*250,5μm,柱温为60℃,流速为1.5ml/min,检测波长为215nm,20μl进样。

    期间,以为是色谱柱坏掉了,就再申购了一根,接着,申购其他品牌的(菲罗门、热电等)也出现色谱峰检测不出,增加流动相中的有机相(乙腈从5%递增到20%)最后终于出峰了。

    其典型色谱峰

    实验结果表明,主峰保留时间为24.380分钟为杂质B的主峰,杂质A还是没有出现,和主峰重合了。

    峡谷中的一丝晨光

    经过和相关色谱柱代理商及技术老师沟通,该品种的两个杂质为同分异构体,杂质A和主峰物质极性太接近,普通填料的苯基柱是无法有效分离的,目前只有西格玛公司的一款专用柱是可以分离出来,销售人员说可以分离,但是我们还不是很相信,因为我们已经购买过4根不同厂家的色谱柱,费用也是相当厉害的,这次希望他们提供相关的色谱图,做到心中有数,一般研究机构是不会拿图给人家的,后来在欧洲药典的一个小附件找到了,终于一览芳容,那两个可爱的“小调皮”一前一后伴随着的主峰姗姗而来,此款柱子今日刚到货。

    该品种据说很火,国内市场一次性订购基本上50根,我估计至少有10家在研究该品种。

    前面提到的西格玛专用柱,到货还没有在我手上,希望能更多的了解其独特的填料,和大家分享下,因为参照美国药典的方法(条件较苛刻 柱温60℃)会耗费很多根色谱柱的,我们预计的10根把这个品种做完,另外我用到的热电的色谱柱参照美国药典的方法,主峰保留时间约为60分钟,杂质B能有效分离,销售人员说这根色谱柱的填料是阿尔法什么东东,要别他什么东东的才,可惜国内没有现货,预计订货周期长,就选择了西格玛。

    现在犯愁了,这几根色谱柱怎么办,其他品种用到的,现在基本上已经做完了。

    晨光中的林荫大道

    根据上面的实验结果,我豁然开朗了,何不在选择方法上改变下思路,有关物质我用西格玛的色谱柱进行研究,预算了下要300针,改变下柱温,即降低到40℃,若方法可行,3根色谱柱应该绰绰有余了;含量测定我用以前剩下的苯基柱(月旭、热电、菲罗门),因为他们的性能太相似呢,即色谱峰行为很一致,把含量测定的系统适用性要求给改变下,在未检出杂质A(以西格玛色谱柱检测杂质A)的情况下,以杂质B作为系统分离度试验,这样思路就不僵化了,摆脱了以前的困惑和迷失。

    道在于走,更在于走中的“悟”

    在这个品种研究中,我有个很深的体会就是多问人,多翻看外国药典,加强自己的外语水平,以上,希望同行多指教。

    后续的月旭体会文章会谈到用月旭色谱柱进行的含量测定研究(根据上图,可以调整流动相中的乙腈来使主峰保留时间在7至10分钟内,杂质B应该是能有效分离的,分离度大于1.5是没有问题的)。有关物质因不是月旭公司的就不再提及了。
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  • 三人行

    第1楼2013/06/10

    图中的基线没有跑平,正常情况下基线咋样?

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  • 东风恶

    第2楼2013/06/10

    谢谢您的关心,并祝愿您和您的家人端午节快乐!

    我为了体现主峰后面的杂质B,把基线放大了,故不是很平。

    三人行(jncxyy2012) 发表:图中的基线没有跑平,正常情况下基线咋样?

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  • 三人行

    第3楼2013/06/10

    也祝愿您和您的家人端午节快乐!有时跑梯度基线很难平。

    东风恶(luoleqc) 发表:谢谢您的关心,并祝愿您和您的家人端午节快乐!

    我为了体现主峰后面的杂质B,把基线放大了,故不是很平。

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  • zhw19811005

    第4楼2013/06/10

    需要很高的英语水平啊

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  • yifan1117

    第5楼2013/06/11

    还是要学好英语,多找资料呀。

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  • 东风恶

    第6楼2013/06/11

    因为国外的很多资料能给我们提供很多信息,会对我们的思维有益的。

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  • fengmo4668

    第7楼2013/06/12

    做系统适用性,不选择杂质A作为考察对象而选择杂质B作为考察对象,而且,有关物质检查中还要体现杂质A和杂质B,会不会在说服审评专家方面有些难度?

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  • fengmo4668

    第8楼2013/06/12

    把杂质A的图贴一张上来呗,让大家看看它的真实面目吧。也不枉你折腾了这么久!可以显摆一下!呵呵

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  • yu3226033

    第9楼2013/06/12

    还是东风恶历害,可申购任向品牌产品使用.

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  • 三人行

    第10楼2013/06/12

    做有关物质,主峰的峰面积有点小。

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