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“色”路蹒跚，从迷失中走来，记某品种的检测方法的摸索过程

东风恶

2013/06/10

此篇，继前篇“色谱“黑洞”，某品种有关物质分析摸索”后续研究摸索。
研究结论为，本品中提及的杂质A和杂质B是该品的同分异构体，其中杂质A和该品的极性很类似（邻间关系），极难分开，以前的流动相洗脱能力有限，易残留在色谱柱上，需要加大流动相中的乙腈比例，以该流动相作为流动相A，以70%的乙腈作为流动相B，AB比例为80:20才能有效的洗脱出，即下图。咨询了很多同行以及代理商的技术老师，该品在欧洲药典上有收载，因选用特殊色谱柱来进行有关物质的研究。
色谱柱信息：苯基柱Ultimate XB-Phenyl SN:241301533，LN:2401.11
色谱条件：USP35 NF30收载：苯基柱，流动相为甲醇-乙腈-缓冲液（2.7g/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值为3.0±0.2）（3:1:6）,4.6*250,5μm，柱温为60℃，流速为1.5ml/min，检测波长为215nm，20μl进样。

期间，以为是色谱柱坏掉了，就再申购了一根，接着，申购其他品牌的（菲罗门、热电等）也出现色谱峰检测不出，增加流动相中的有机相（乙腈从5%递增到20%）最后终于出峰了。

其典型色谱峰

实验结果表明，主峰保留时间为24.380分钟为杂质B的主峰，杂质A还是没有出现，和主峰重合了。

峡谷中的一丝晨光

经过和相关色谱柱代理商及技术老师沟通，该品种的两个杂质为同分异构体，杂质A和主峰物质极性太接近，普通填料的苯基柱是无法有效分离的，目前只有西格玛公司的一款专用柱是可以分离出来，销售人员说可以分离，但是我们还不是很相信，因为我们已经购买过4根不同厂家的色谱柱，费用也是相当厉害的，这次希望他们提供相关的色谱图，做到心中有数，一般研究机构是不会拿图给人家的，后来在欧洲药典的一个小附件找到了，终于一览芳容，那两个可爱的“小调皮”一前一后伴随着的主峰姗姗而来，此款柱子今日刚到货。

该品种据说很火，国内市场一次性订购基本上50根，我估计至少有10家在研究该品种。

前面提到的西格玛专用柱，到货还没有在我手上，希望能更多的了解其独特的填料，和大家分享下，因为参照美国药典的方法（条件较苛刻柱温60℃）会耗费很多根色谱柱的，我们预计的10根把这个品种做完，另外我用到的热电的色谱柱参照美国药典的方法，主峰保留时间约为60分钟，杂质B能有效分离，销售人员说这根色谱柱的填料是阿尔法什么东东，要别他什么东东的才，可惜国内没有现货，预计订货周期长，就选择了西格玛。

现在犯愁了，这几根色谱柱怎么办，其他品种用到的，现在基本上已经做完了。

晨光中的林荫大道

根据上面的实验结果，我豁然开朗了，何不在选择方法上改变下思路，有关物质我用西格玛的色谱柱进行研究，预算了下要300针，改变下柱温，即降低到40℃，若方法可行，3根色谱柱应该绰绰有余了；含量测定我用以前剩下的苯基柱（月旭、热电、菲罗门），因为他们的性能太相似呢，即色谱峰行为很一致，把含量测定的系统适用性要求给改变下，在未检出杂质A（以西格玛色谱柱检测杂质A）的情况下，以杂质B作为系统分离度试验，这样思路就不僵化了，摆脱了以前的困惑和迷失。

道在于走，更在于走中的“悟”

在这个品种研究中，我有个很深的体会就是多问人，多翻看外国药典，加强自己的外语水平，以上，希望同行多指教。

后续的月旭体会文章会谈到用月旭色谱柱进行的含量测定研究（根据上图，可以调整流动相中的乙腈来使主峰保留时间在7至10分钟内，杂质B应该是能有效分离的，分离度大于1.5是没有问题的）。有关物质因不是月旭公司的就不再提及了。

精
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三人行

第1楼2013/06/10

图中的基线没有跑平，正常情况下基线咋样?

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东风恶

第2楼2013/06/10

谢谢您的关心，并祝愿您和您的家人端午节快乐！

我为了体现主峰后面的杂质B，把基线放大了，故不是很平。
三人行(jncxyy2012) 发表:图中的基线没有跑平，正常情况下基线咋样?

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三人行

第3楼2013/06/10

也祝愿您和您的家人端午节快乐！有时跑梯度基线很难平。
东风恶(luoleqc) 发表:谢谢您的关心，并祝愿您和您的家人端午节快乐！

我为了体现主峰后面的杂质B，把基线放大了，故不是很平。

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zhw19811005

第4楼2013/06/10

需要很高的英语水平啊

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精
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yifan1117

第5楼2013/06/11

还是要学好英语，多找资料呀。

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精
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东风恶

第6楼2013/06/11

因为国外的很多资料能给我们提供很多信息，会对我们的思维有益的。

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精
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fengmo4668

第7楼2013/06/12

做系统适用性，不选择杂质A作为考察对象而选择杂质B作为考察对象，而且，有关物质检查中还要体现杂质A和杂质B，会不会在说服审评专家方面有些难度？

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fengmo4668

第8楼2013/06/12

把杂质A的图贴一张上来呗，让大家看看它的真实面目吧。也不枉你折腾了这么久！可以显摆一下！呵呵

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精
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yu3226033

第9楼2013/06/12

还是东风恶历害,可申购任向品牌产品使用.

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精
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三人行

第10楼2013/06/12

做有关物质，主峰的峰面积有点小。

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精
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