蛋白样品污染C18色谱柱的冲洗方法

很有参考价值的修复手段，我来回答一下，以作抛砖引玉。

污染物积累在筛板上，清洗筛板和反冲有效。

蛋白质遇到有机相变性析出，堵在柱头端。

柱两端的筛板大小一样，柱床填得紧密的柱子，小流量反冲无影响。

三氟乙酸是离子对试剂，增加蛋白质溶解性？

冲洗3h是为了除掉三氟乙酸？

测定柱效确定柱子本身有没有问题。

如果分岔是由于筛板被部分阻塞造成的，那么清洗筛板就是必要的，而且伴随分岔可能柱压也增加。

如果柱压没有增加，可能就是柱头处的填料吸附了蛋白，那么加酸反冲就应该有效果。反冲的话，色谱柱两端筛板的孔径必须要是一致的，流速要小，否则反冲也会导致柱头塌陷。

加酸破坏蛋白的三级结构，对破坏填料对蛋白的吸附会有用。

可能是造成柱效下降了

1、对于筛板的清洗，我同意TANGTANG老师的看法，主要还是污染物在筛板上聚集了，或者堵住了筛板，造成了筛板部分孔径是通的，部分是不通的，这样进样以后，样品不是从一个平面进入柱子，导致峰拖尾。

很多时候由于筛板的污染，造成了峰拖尾。

2、蛋白样品是否特别容易损坏色谱柱，进7针就有问题了？
这个问题比较复杂，
比如说蛋白溶解的液体，流动相的配比，都有关系，蛋白在流动相中会不会重新凝结或者团聚？这个都是要考虑的问题。
一般来说如果C18的吸附太强的话，是不是可以考虑用C8或者C4，甚至是C2?

总结蛋白样品容易破坏色谱柱可能有三个原因：

A、蛋白样品一般是从植物或动物组织中提取纯化的，杂质比较复杂，如果客户处理不得当，会很快损坏柱子，比如没有高速离心或者用针式滤器过滤颗粒物，从而导致筛板堵塞；或者其它非极性小分子杂质与填料发生作用，损坏了固定相。

B、蛋白样品不溶于流动相，重新凝集，尤其是有机溶剂（如tangtang老师所说，蛋白质遇到有机相变性析出，堵在柱头端）

C、蛋白有很多种，有极性大的和极性较小的蛋白，小极性蛋白会吸附在填料上影响分离（如vcningmeng老师所说，可以考虑用C8或者C4，甚至是C2）。

3、反冲对色谱柱有影响吗，这样操作是否对？
一般的情况下，不建议这么做；除非是这根柱子实在是不行了，比如说堵住了，或者柱头污染比较厉害，需要用极性较小的溶剂反冲。
一般按照我们实验室的习惯，反冲以后的柱子，就按照反冲的方向来使用了。

筛板被蛋白质洗出堵住了吧所以要清洗