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关于供试品中含有较高浓度的离子对试剂,导致出峰时间漂移的问题

液相色谱(LC)

  • 本人在做一个产品的溶出度方法的验证。

    溶出介质是0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-2%十二烷基硫酸钠溶液(PH7.5)。

    色谱条件:C18的柱子,0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)-甲醇(6:4)为流动相;柱温40℃,检测波长229nm。

    问题一:出峰时间漂移非常明显,第一针5.9min,第二针6.8min,第三针8.1min,到第六针就能漂移到12min。

    问题二:标准要求理论塔板数2000以上,但是我用安捷伦和岛津的柱子,却只能到达1000+,而且峰型很差。

    我知道十二万基硫酸钠的浓度很大,而且样品的介质和色谱系统差得很多,但是这个标准是辉瑞的进口注册标准,我很诧异怎样才能做到标准上要求的。

    请各位同行给点建议,谢谢
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  • xiaowang268

    第1楼2013/06/25

    时间漂移,先换个柱子试试,排除柱子问题

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  • xiaowang268

    第2楼2013/06/25

    看看管道有没有气泡,或漏液现象

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  • 三人行

    第3楼2013/06/25

    十二烷基硫酸钠很伤柱子。

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  • 小鱼儿111126

    第4楼2013/06/26

    离子对浓度大的话,需要平衡很长时间的,你是不是平衡时间不够呢

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  • tasche

    第5楼2013/06/26

    我样品里使用浓度较高的离子对试剂处理的,流动相里并没有离子对试剂,所以我很困惑

    小鱼儿111126(v2686142) 发表:离子对浓度大的话,需要平衡很长时间的,你是不是平衡时间不够呢

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  • 小鱼儿111126

    第6楼2013/06/26

    哦,这样子啊。

    有没有观察泵的压力呢?会不会是哪里漏液或者泵不准确了呢?

    tasche(tasche) 发表:我样品里使用浓度较高的离子对试剂处理的,流动相里并没有离子对试剂,所以我很困惑

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  • xiaowang268

    第7楼2013/06/26

    最好换机子和柱子先试试,确保色谱系统没问题

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  • tasche

    第8楼2013/06/27

    压力非常稳定,检查过了,无漏夜可能

    小鱼儿111126(v2686142) 发表:哦,这样子啊。

    有没有观察泵的压力呢?会不会是哪里漏液或者泵不准确了呢?

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  • doczheng

    第9楼2013/06/27

    应该可以排除离子对试剂对样品的出峰时间的影响,你的溶出介质才是含有十二烷基硫酸钠的,至于你还要用流动相进行稀释的,
    我之前用过的十二烷基硫酸钠和甲醇的流动相,都没有出现保留时间漂移的情况
    你的样品是溶出度实验做完之后是怎么处理的,有过滤吗?稀释的方法呢?

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  • doczheng

    第10楼2013/06/27

    塔板数才一千多,这是要怎么样的峰形才能达到?

    tasche(tasche) 发表:本人在做一个产品的溶出度方法的验证。

    溶出介质是0.05mol/L磷酸二氢钠溶液-2%十二烷基硫酸钠溶液(PH7.5)。

    色谱条件:C18的柱子,0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)-甲醇(6:4)为流动相;柱温40℃,检测波长229nm。

    问题一:出峰时间漂移非常明显,第一针5.9min,第二针6.8min,第三针8.1min,到第六针就能漂移到12min。

    问题二:标准要求理论塔板数2000以上,但是我用安捷伦和岛津的柱子,却只能到达1000+,而且峰型很差。

    我知道十二万基硫酸钠的浓度很大,而且样品的介质和色谱系统差得很多,但是这个标准是辉瑞的进口注册标准,我很诧异怎样才能做到标准上要求的。

    请各位同行给点建议,谢谢

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