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“色”路蹒跚，一马平川，某品种溶出度方法学部分

东风恶

2013/06/26

私聊

厂商论坛

合二为一一马平川川流不息息息相通通风报讯迅电流光光明磊落落荒而逃逃之夭夭夭桃穠李李下瓜田田连阡陌陌路相逢逢山开路路绝人稀。

项目：溶出度（3.2.P.5.2.4）

检查方法：

（1）、溶出度试验条件：

仪器：智能溶出试验仪（型号：ZRS-8G）

溶出介质：0.05mol/L的枸橼酸盐缓冲液[称取二水合枸橼酸钠（C₆H₅Na₃O₇·2H₂O）147g，用2000ml水溶解，加无水枸橼酸（C₆H₈O₇）3.3g，用水稀释至10000ml，摇匀。必要时用枸橼酸钠或枸橼酸调节pH至6.6±0.05]（规格为5mg溶出介质为900ml，规格为10mg溶出介质为1000ml）

溶出装置：桨法

转速：50rpm

取样时间：30min

溶出介质温度：37±0.5℃

具体试验操作：取本品，照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录 X C 第二法），以0.05mol/L的枸橼酸盐缓冲液[称取二水合枸橼酸钠（C₆H₅Na₃O₇·2H₂O）147g，用2000ml水溶解，加无水枸橼酸（C₆H₈O₇）3.3g，用水稀释至10000ml，摇匀。必要时用枸橼酸钠或枸橼酸调节pH至6.6±0.05]为溶出介质（规格为5mg溶出介质为900ml，规格为10mg溶出介质为1000ml），转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液10ml滤过，取续滤液作为供试品溶液（规格为5mg），或精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液（规格为10mg）。

（2）、溶出度测定测定条件：

检查方法：HPLC法

色谱柱（柱长：150mm，内径：4.6mm，填料：C₁₈，填料粒径：5μm）

(welchrom-C18，5μm，4.6*150mm；PN：wel518415，SN:W11212203）

UV检测器（检测波长：242nm）

柱温：室温

流动相：水-乙腈-磷酸（600：400：1）

流速：1.0ml/min

运行时间：约12分钟

系统适用性：*******汀峰的拖尾因子应不得过1.5。

具体试验操作：取*******汀钙对照品适量，精密称定，加0.05mol/L的枸橼酸缓冲液溶解，制成每1ml中约含*******汀钙5μg的溶液，作为对照品溶液。分别取上述供试品溶液与对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出每片的溶出量。

计算公式：

每片溶出量（%）=××100%

式中：Cs为对照品的浓度（以*******汀钙计，mg/ml）；

At为供试液的主峰面积；

Nt为供试液的稀释倍数；

As为对照品溶液的主峰面积；

W为本品规格，以mg计。

3.2.P.5.3.3.1 溶出度测定方法学

本品规格为5mg和10mg，其处方量不同，检测方法学研究以两个规格样品进行；以0.1mol/L盐酸溶液、水、pH4.5醋酸盐缓冲液和0.05mol/L枸橼酸缓冲液为溶出介质，以下简称为四种溶出介质。

3.2.P.5.3.3.1.1溶出度测定方法的选定

因*******汀钙在242nm波长处有较强的紫外吸收，参照*******汀钙片进口药品注册标准JX20050198溶出度项（HPLC法），采用专属性较高的HPLC法作为本品溶出量检测方法。色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水-乙腈-磷酸（600：400：1）为流动相，检测波长242nm。

3.2.P.5.3.3.1.2辅料和溶出介质干扰试验（色谱图见附件197～216）

（1）、试验方法与具体步骤：

样品供试液：

①取样品（规格：5mg，批号：20120401）细粉约0.6g，置200ml量瓶中，分别加四种溶出介质适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取5ml，置100ml量瓶中，分别加四种溶出介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液；

②取样品（规格：10mg，批号：20120401）细粉约0.3g，置200ml量瓶中，分别加四种溶出介质适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取5ml，置100ml量瓶中，分别加四种溶出介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液；

溶剂（溶出介质）：0.1mol/L盐酸溶液、水、pH4.5醋酸盐缓冲液和0.05mol/L枸橼酸缓冲液；

空白辅料供试液：称取处方量空白辅料适量，置200ml量瓶中，分别加四种溶出介质适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取5ml，置100ml量瓶中，分别加四种溶出介质稀释至刻度，摇匀，取续滤液作为供试液。

精密量取以上溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

（2）、试验结果见下图。

3.2.P.5.3.3.1.3滤膜吸附性试验（色谱图见附件217～249）

（1）、试验方法与具体步骤：

①溶出介质为水：精密称取样品（规格：5mg，批号：20120401）细粉0.6018g，置200ml量瓶中，加水适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，经0.45μm水系滤膜滤过，先滤过2ml，再滤过5ml，接着滤过10ml，分别取上述续滤液作为供试液；

精密称取样品（规格：10mg，批号：20120401）细粉0.3021g，置200ml量瓶中，同上操作，分别取上述续滤液作为供试液。

②溶出介质为0.1mol/L盐酸溶液：精密称取样品（规格：5mg，批号：20120401）细粉0.6043g，置200ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，经0.45μm水系滤膜滤过，先滤过2ml，再滤过5ml，接着滤过10ml，分别取上述续滤液作为供试液；

精密称取样品（规格：10mg，批号：20120401）细粉0.3028g，置200ml量瓶中，同上操作，分别取上述续滤液作为供试液。

③溶出介质为pH4.5醋酸盐缓冲液：精密称取样品（规格：5mg，批号：20120401）细粉0.6001g，置200ml量瓶中，加pH4.5醋酸盐缓冲液适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加pH4.5醋酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，经0.45μm水系滤膜滤过，先滤过2ml，再滤过5ml，接着滤过10ml，分别取上述续滤液作为供试液；

精密称取样品（规格：10mg，批号：20120401）细粉0.3017g，置200ml量瓶中，同上操作，分别取上述续滤液作为供试液。

④溶出介质为0.05mol/L枸橼酸缓冲液：精密称取样品（规格：5mg，批号：20120401）细粉0.6014g，置200ml量瓶中，加0.05mol/L枸橼酸缓冲液适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.05mol/L枸橼酸缓冲液稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，经0.45μm水系滤膜滤过，先滤过2ml，再滤过5ml，接着滤过10ml，分别取上述续滤液作为供试液；

精密称取样品（规格：10mg，批号：20120401）细粉0.3026g，置200ml量瓶中，同上操作，分别取上述续滤液作为供试液。

⑤分别取上述四种溶出介质未滤过液作为对比供试液。

分别精密量取上述供试液10μl，注入高效液相色谱仪，并记录色谱图。

（2）、滤膜吸附试验结果见下表。

试验结果

溶出介质	项目	未过滤	第一次过滤	第二次过滤	第三次过滤
水	主峰面积	147301	143929	146703	146310
水	吸附值（%）	-	2.29	0.41	0.67
0.1mol/L盐酸	主峰面积	146514	140073	144114	147179
0.1mol/L盐酸	吸附值（%）	-	4.40	1.64	-0.45
pH4.5醋酸盐缓冲液	主峰面积	140567	129665	136576	139218
pH4.5醋酸盐缓冲液	吸附值（%）	-	7.76	2.84	0.96
0.05mol/L枸橼酸缓冲液	主峰面积	118134	96533	109592	116095
0.05mol/L枸橼酸缓冲液	吸附值（%）	-	18.29	7.23	1.73

本试验采用水系滤膜进行吸附性试验，经0.45μm水系滤膜滤过，先滤过2ml，再滤过5ml，接着滤过10ml，第三次滤过最大吸附为1.73%，小于2.0%，滤膜吸附性可忽略不计，取样后滤过20ml，再取续滤液作为供试液。

3.2.P.5.3.3.1.4线性关系试验（色谱图见附件250～269）

（1）、试验方法与具体步骤：

分别精密称取对照品约0.01g，置200ml量瓶中，分别加四种溶出介质适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为储备液。分别精密量取储备液2ml、3ml、4ml、5ml、6ml置50ml量瓶中，分别用四种溶出介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液。分别精密量取供试液10μl注入高效液相色谱仪并记录色谱图。

（2）、试验结果见下表图。

试验结果经线性回归分析，在1.99µg/ml～5.96µg/ml浓度范围内，直线方程为y=24311.2425x-33.0000，R²=1.0000，相关系数r=1.0000，截距为33.0，在100%浓度峰面积的±2%（±2415.26）范围，线性关系良好。

3.2.P.5.3.3.1.5精密度试验（色谱图见附件270～293）

（1）、试验方法与具体步骤：

精密称取对照品约0.02g，置200ml量瓶中，分别加四种溶出介质适量超声使溶解并稀释至刻度，精密量取续滤液5ml置100ml量瓶中，分别加四种溶出介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液，精密量取供试液10μl注入液相色谱仪并记录色谱图，同法测量6次。

（2）、精密度试验结果见下表。

四种溶出介质*******汀钙主峰面积统计结果

介质名称	1	2	3	4	5	6	RSD
水	120121	120278	119976	119964	119734	119880	0.16%
0.1mol/L盐酸	145035	144289	143728	143272	142765	141684	0.82%
pH4.5醋酸盐缓冲液	115822	115816	115865	115773	115797	115755	0.03%
0.05mol/L枸橼酸缓冲液	120495	120467	120451	120494	120368	120443	0.04%

本品精密度试验结果最大RSD值为0.82%，均小于1.0%，符合验证要求。

3.2.P.5.3.3.1.6溶液稳定性试验（色谱图见附件294～341）

（1）、试验方法与步骤

①溶出介质为水：精密称取样品（规格：5mg，批号：20120401）细粉0.6028g，置200ml量瓶中，加水适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，经0.45μm水系滤膜滤过，先滤过2ml，再滤过5ml，接着滤过10ml，分别取上述续滤液作为供试液；

精密称取样品（规格：10mg，批号：20120401）细粉0.3048g，置200ml量瓶中，同上操作，分别取上述续滤液作为供试液。

②溶出介质为0.1mol/L盐酸溶液：精密称取样品（规格：5mg，批号：20120401）细粉0.6017g，置200ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，经0.45μm水系滤膜滤过，先滤过2ml，再滤过5ml，接着滤过10ml，分别取上述续滤液作为供试液；

精密称取样品（规格：10mg，批号：20120401）细粉0.3014g，置200ml量瓶中，同上操作，分别取上述续滤液作为供试液。

③溶出介质为pH4.5醋酸盐缓冲液：精密称取样品（规格：5mg，批号：20120401）细粉0.6041g，置200ml量瓶中，加pH4.5醋酸盐缓冲液适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加pH4.5醋酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，经0.45μm水系滤膜滤过，先滤过2ml，再滤过5ml，接着滤过10ml，分别取上述续滤液作为供试液；

精密称取样品（规格：10mg，批号：20120401）细粉0.3022g，置200ml量瓶中，同上操作，分别取上述续滤液作为供试液。

④溶出介质为0.05mol/L枸橼酸缓冲液：精密称取样品（规格：5mg，批号：20120401）细粉0.6035g，置200ml量瓶中，加0.05mol/L枸橼酸缓冲液适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.05mol/L枸橼酸缓冲液稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，经0.45μm水系滤膜滤过，先滤过2ml，再滤过5ml，接着滤过10ml，分别取上述续滤液作为供试液；

精密称取样品（规格：10mg，批号：20120401）细粉0.3015g，置200ml量瓶中，同上操作，分别取上述续滤液作为供试液。

取上述供试液，室温放置，分别于第0、2、4、6、8、10小时，分别精密量取上述供试液10μl，注入高效液相色谱仪，并记录色谱图。

（2）、溶液稳定性试验结果见下表。

稳定性试验结果

溶出介质	规格	主峰面积						RSD%
溶出介质	规格	0h	2h	4h	6h	8h	10h	RSD%
水	5mg	135326	135549	135443	135218	135106	134891	0.18
水	10mg	125352	125564	125614	125560	125532	125460	0.07
0.1mol/L盐酸溶液	5mg	132960	132984	133145	133283	133264	133273	0.11
0.1mol/L盐酸溶液	10mg	125504	125749	125763	125765	125856	126072	0.15
pH4.5醋酸盐缓冲液	5mg	121714	122063	122487	122534	122301	122492	0.26
pH4.5醋酸盐缓冲液	10mg	120339	120247	120501	120395	120520	120637	0.12
0.05mol/L枸橼酸缓冲液	5mg	121250	120594	120180	119889	119494	119158	0.63
0.05mol/L枸橼酸缓冲液	10mg	119258	119158	116185	115709	115259	114668	1.69

结果表明，本品溶液稳定。

3.2.P.5.3.3.1.7回收率试验（色谱图见附件342～504）

（1）、试验方法与步骤：

按检查浓度的60%、80%、100%，各精密称取*******汀钙三份，照处方加入适量处方量辅料，置200ml量瓶中，分别加四种溶出介质适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液，精密量取供试液10μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

（2）、回收率测定结果见下表。

试验结果表明，平均回收率均在98%～102%之间，结果值的RSD%（n=9）均小于2.0%，试验符合验证要求。

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