博纳艾杰尔农药残留检测攻略【连载】

首先介绍一下农残检测常用的两个方法：

1、第一种称为基质固相萃取法，也叫QuEChERS；

QuEChERS---quick, easy, cheap, effective, rugged, and safe （2003美国农业部ARS化学家Steven J.Lehotay和德国斯图加特CVUA实验室的Michelangelo Anastassiades开发）

后来该方法被AOAC借鉴，又被中国专家引入到中国并做了调整，开发出了NYT-1380-2007这个方法；

这种方法主要的操作步骤如下：

其中包含提取和净化两步，提取管一般都装有无水硫酸镁，缓冲盐，用于脱水和帮助农药的提取，当需要检测的农药对酸碱度敏感时，提取管中则需要加入缓冲盐，例如醋酸盐，柠檬酸盐等。商品化的农残净化管所替代人工称量造成的不准确和麻烦，无需提前烘无水硫酸镁，也无需每个样品都挨个称量，大大节省了操作时间；

例如 Cleanert MAS-Q 系列其中就将该方法中的缓冲盐和净化材料做成了商品化的密封包；

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2、另外一种常用的净化方法是固相萃取法，例如NY761-2008蔬菜水果中有机氯农药多残留分析及GB/T 19648-2005 蔬菜水果中 446种农药多残留分析方法

此类方法也是利用固相萃取柱中的填料吸附样品提取液中的杂质干扰物，选择合适的洗脱上样溶剂，保证待分析的农药残留不会被过渡吸附在柱子上，NY761-2008方法中使用的固相萃取柱是 Florisil 弗罗里硅土材料，其主要成分组成包含，二氧化硅（84%），氧化镁（15.5）和硫酸钠（0.5%）三种成分，是较常用的另一种做有机氯和菊酯类农残检测的固相萃取柱，比较适合简单基质的蔬菜水果中的农残检测，由于对部分有机磷类农药会存在过渡吸附的问题，并且对色素的去除效果不甚理想，所以又其使用的局限性。

GB/T 19648-2005中使用的PestiCarb NH2 复合柱，最早见于日本厚生劳动省颁布农药检测方法，后被用于国标推荐方法中，该固相萃取柱属于复合柱，由两层不同的固相萃取填料组成，第一层为丙氨基硅胶，针对蔬果中的酸性杂质，例如果酸和叶酸等，第二层为石墨化碳，其对叶绿素有较强的去除能力，并且能吸附一部分极性杂质干扰物，减少离子效应，多配合GC/MS 或LC/MS/MS等检测手段，可以实现高灵敏度的检出限和稳定的RSD；

使用PestiCarb NH2 复合柱时常用的洗脱溶剂为乙腈，由于石墨化碳的多环立体结构，会造成对一些含苯环较多的农药吸附力较强，需要在乙腈中添加一些甲苯以帮助含苯环农药的洗脱，由于甲苯属于易制毒溶剂，不易购买，也有选择丙酮：正己烷（4:6；v:v）混合溶剂用于洗脱，但由于丙酮对色素的洗脱力明显强于乙腈，所以会将乙腈吸附在填料上的色素随分析物一起洗脱下来一部分，所以不太适合高色素样品体系；

并且由于水分会影响石墨化碳的除杂能力，所以建议在乙腈提取液中加入1-2g的NACL用于乙腈和水相分层，或直接将烘烤过的无水硫酸钠加入PestiCarb NH2 复合柱上端，样液在流过无水硫酸钠时，其中的微量水分就被除掉了；

GB/T 19648-2005 蔬菜水果中 446种农药多残留分析方法流程如下：

3、案例分析：

有一些特殊基质的样品，例如茶叶，葱姜蒜，中草药，粮食谷物，韭菜等，因为基质中色素浓度高，或包含一些硫化物，油脂等普通方法无法取出的杂质，会影响这类基质中的农残检测结果；这部分基质建议采用有针对性的方法或净化材料，已实现检测目的；

案例1：茶叶样品

我国常见的茶叶种类目前分5种，花茶，绿茶，红茶，乌龙茶和普洱茶，其中花茶和绿茶的基质相对简单，而乌龙茶和普洱茶发酵程度更高，基质相对更为复杂。所以同样是茶叶样品，使用同样的分析方法也会得到不同的分析结果；

日本2006年实施的农药、兽药及相关化学物质“肯定列表制度”, 其中涉及茶叶的共有144 个品种, 对144 种以外的农药残留则采用“一律标准”(即基准值设定为0.01ppm) ,54 项禁用农药中, 三氯杀螨醇、氰戊菊酯、三唑磷、水胺硫磷和久效磷5项属于重点监视禁用对象。我国国家标准GB9679 - 1988 涉及的农残项目只有六六六、滴滴涕两项。而且此项标准沿用多年内容一直未修订。知道2008年建立的GB/T 23204-2008茶叶中519种农药及相关化学品残留量的测定 gc-MS法GB/T 23205-2008茶叶中448种农药及相关化学品残留量的测定 LC/MS/MS法是近年来国内唯一一个关于茶叶基质中多农残分析的国标方法，该方法涵盖了上述的5种茶叶基质，其中指定使用的Cleanert TPT茶叶专用柱不仅能处理基质相对简单的绿茶和花茶等，同样适用于普洱和红茶等深度发酵茶；该方法发布前，国内的检测结构多采用石墨化碳柱或石墨化碳氨基复合柱来对茶叶样品进行净化，存在的问题就是针对深度发酵类茶叶中的特殊基质干扰无法取出，而且除色素能力明显不够，会对仪器的灵敏度和色谱柱的寿命产生影响。

举例说明

使用同样2.5g茶叶样品，使用同样的方法提取，过柱，洗脱液为乙腈：甲苯（3:1）溶剂，右侧的样品使用的石墨化碳氨基柱，较左侧使用Cleanert TPT 茶叶专用柱的除色素的效果差异已经非常明显（如下图）；

另外方法中采用的茶叶提取溶剂为乙腈，二次提取合并提取液，目的也是保证农残的提取效率的同时，尽量少地将杂质干扰物同时提取出来。

案例3 中草药基质

我国有中草药资源12 807种，其中药用植物达11000多种，但常用的1000多种中药材中近80％的品种、60％的用量靠消耗野生资源来供应。所以样品基质区别较大，而其中可能残留的农残种类和浓度区别很大，给分析工作带来了难点；


从2006年4月起，日本决定继续执行有关人参等5种中药材农残标准，同时计划对甘草、黄芪等15种中药材农药残留标准进行重新设定。而韩国食品医药品安全厅（KFDA）公布了中药材重金属与农残许可标准与检测方法，并于2007年5月正式实行。这是继2005年8月韩国政府公布对中药材二氧化硫的限量要求和检测方法以来对中药材的又一新规定。

规定还明确了六六六等42种农药在常见的30种药材中的农药残留标准。对粳米、枸杞等21种中药农药残留标准则参照食品中残留标准，另外公告还规定了新标准所涉及重金属和农药残留的检验方法。同时欧盟也立法，将中药和食品归为一类，并明确规定进口药品的农残标准。我国虽然已可对中药材中的一些剧毒农药，如六六六、DDT及部分有机磷农药等24种农药单体进行检测，但一些在重要种植过程中可能使用的农药，我们还涉及很少。而GB/T 23200-2008中草药中488种农药及相关化学品残留量的测定 gc-MS法和GB/T 23201-2008中草药中413种农药及相关化学品残留量的测定 LC/MS/MS法也是近年来涉及农药种类最多，涵盖中草药基质较广泛的国标方法；

中草药实际上一个大类，其中涉及的基质差异会很大，但主要可区分为根茎，叶，花，果实，其中根茎类会含有挥发油等脂溶性物质，普通的前处理材料无法去除；而叶类中药会含有较高的色素和叶酸，有一部分果实类会含有糖分等。

GB/T 23200-2008中使用的 Cleanert TPH 选择了四大类中的典型代表，根茎（桑枝）；叶（荷叶）；花（金银花）；果实（枸杞）做样品基质。同时在方法开发中也测试了例如当归，甘草等其他基质，其中根茎类样品由于基质效应能检测到的农药种类相对较少，但一些常用的菊酯类农药及有机磷，有机氯农药仍然有不错的回收和稳定性，如对硫磷，毒死蜱，DDD，DDT，DDE，氯氰菊酯，溴氰菊酯等；

而叶类及花类及果实类中草药基质相对简单，大部分可以实现较好的净化效果，其中例如枸杞类样品，因为含糖量比较高，需要在提取时加入适量的水，在利用氯化钠将水层和已经层分离，只取乙腈层上样，从而将糖分去除；



案例4 粮食谷物类样品

该类样品的特点是含有淀粉及少量的油脂类基质，效果的净化方法一般会选择GPC层析法，不过目前的GPC设备一方面是耗材价格较高，另一方面，每个样品需要逐个过柱，效率较低，前处理耗时较长；如果选择固相萃取法净化，可以采用C18材料和石墨化碳串联来净化样品。例如GB/T 19649-2006 粮谷中475种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法，即采用了类似的净化方法。该方法适用于大米、小米、黑米、玉米、大麦、小麦、燕麦等基质。

如果脂肪含量更高的样品，可以采用在提取后先经过正己烷液液萃取除脂肪，再过固相萃取净化柱的方法已满足检测要求。

其他基质，例如牛奶，因为蛋白质为主要干扰物质，可以考虑加入有机溶剂或金属离子，酸等物质用于沉淀蛋白，过C18固相萃取柱再进行净化；蜂蜜果汁等样品，如果糖度较高，需要用水稀释后，用二氯甲烷或丙酮类的溶剂进行液液萃取后再将有机层浓缩过石墨化碳氨基复合柱用于净化；

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应助达人

韭菜中基质复杂，Cleanert NANO这种小柱多少钱？用NY761做蔬菜中有机磷的测定时，蔬菜色素严重，易污染色谱柱，请问有什么好的方法吗？有可以使用的小柱吗？成本高吗？

很好的东东,支持小V版主