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“色”路蹒跚，即鹿无虞，某品种有关物质方法学流动相摸索。

东风恶

2013/07/13

“色”路蹒跚，即鹿无虞，某品种有关物质方法学流动相摸索。
因暂时没有CERI L-column色谱柱，挑选了以前常用的色谱柱，进行了流动相的摸索，日产某品牌因理论板数较低（小于2000），故没有采用，选用月旭的色谱柱，一切皆好，试验完成后，把工艺处方摸索的样品都测试完成后，发现是用的苯基柱，虽说都是反相色谱柱，和标准不一致，要验证的，真是即鹿无虞啊！
有关物质避光操作。照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录Ⅴ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（CERI L-column ODS，4.6mm×250mm，5μm或同等效能的色谱柱）；流动相A为pH3.8醋酸钠缓冲液[取稀醋酸10ml，加水稀释至1000ml，取此溶液800ml，加醋酸钠溶液（取醋酸钠试液1ml，加水稀释至100ml）100ml，混匀]，流动相B为乙腈，按下表进行梯度洗脱：

时间（分钟）
0
20
40
70
71
80
流动相A（%）
60
60
30
30
60
60
流动相B（%）
40
40
70
70
40
40

柱温为40℃，检测波长245nm。取苯甲酸乙酯约0.2g，置50ml量瓶中，加乙腈-水（3:2）溶解并稀释至刻度，混匀。取此溶液和供试品溶液各5ml置同一50ml量瓶中，用乙腈-水（3:2）稀释至刻度，摇匀，

作为分离度测试溶液，量取10μl注入液相色谱仪，调整色谱系统，使匹伐他汀的保留时间约为23分钟，

取对照溶液重复进样6次，主峰面积的相对保留时间偏差应小于9%，匹伐他汀与苯甲酸乙酯峰之间的分离度不小于5。

测定法取本品5片，置50ml量瓶中，加水20ml，振摇10分钟至片剂崩解，再超声5分钟，加乙腈20ml，振摇10分钟，加乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液适量，加乙腈-水（3:2）稀释制成每1ml中约含匹伐他汀钙0.2μg的溶液，作为对照溶液。量取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使匹伐他汀的峰高约为记录仪器量程的5～10%，再精密量取供试品和对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中除溶剂峰与辅料峰外，差向异构体（相对保留时间约为1.1）、内酯化合物（相对保留时间为1.7）和其他未知杂质的峰面积分别不得过对照溶液主峰面积的7.5倍（0.75%）、5倍（0.5%）和1倍（0.1%），杂质总量不得过对照溶液主峰面积的20倍（2.0%）。

色谱柱信息：

1.日产的C18色谱柱（都是大家最常用和常见品牌，未写出，主要怕麻烦）。

2.月旭的C18色谱柱，在使用的过程中，操作人员弄成月旭的苯基柱。

苯基柱信息：苯基柱：SN：241301633， LN:2401.11

日产C18色谱图：

上图显示，理论板数较低，只有1834，虽说都是新柱子，也可能是流动相不适合该色谱柱，保留时间较短，要达到23分钟，调整流动相比例，估计理论板数会更低，故没有再折腾。

上图显示，其基线重现性良好，显示了新柱子的基本性能。

月旭苯基柱色谱图：

上图显示，理论板数较高，超过了10000，分离度和拖尾因子均较好，调整流动相比例，应该是有可能的。

调整流动相比例色谱图：

上图显示，分离度，拖尾因子，理论板数均好，大功告成（高兴的较早哈，呵呵。。。）

下图为放大显示：

总结，做试验是个细致活，在没有充足的条件下，创造条件，是好事，但是要注意细节（注意看标签，不要看到月旭的就想到了是C18），不然会走弯路的，我现在要进行色谱柱验证了，和C18进行对比。

精
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三人行

第1楼2013/07/13

是该物质本身怕光，还是在流动相中见光易分解？

0

玲珑

第2楼2013/07/14

是和月旭的做对比的啊？

0

精
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yifan1117

第3楼2013/07/14

需要考虑的真不少

0

东风恶

第4楼2013/07/14

本身怕光且在溶液中见光易分解。
三人行(jncxyy2012) 发表:是该物质本身怕光，还是在流动相中见光易分解？

0

东风恶

第5楼2013/07/14

是和月旭的做对比，只是用的是月旭的苯基柱对比。
玲珑(zhushengjun) 发表:是和月旭的做对比的啊？

0

东风恶

第6楼2013/07/14

该品种有点特殊，根据很多资料显示，该品种有几个异构体是很麻烦的事情。
yifan1117(yifan1117) 发表:需要考虑的真不少

0

御风飘逝

第7楼2013/07/14

即鹿无虞死什么意思？

0

精
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三人行

第8楼2013/07/14

这样更应避光操作。
东风恶(luoleqc) 发表:本身怕光且在溶液中见光易分解。

0

精
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zhw19811005

第9楼2013/07/14

该品种有几个异构体，那在实验时就要考虑更多的东西了

0

精
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fengmo4668

第10楼2013/07/14

用你筛选好的色谱条件，再走日产的C18柱，色谱图会是个什么情况呢？

0

精
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