前提:β—胡萝卜素(β-Carotene),CAS号为7235-40-7,其分子式为 C40H56,紫红或暗红色的结晶性粉末。不溶于水,微溶于乙醇和乙醚,易溶于氯仿苯和油。熔点176~180℃。在动物体内可转变为维生素A的物质称为前维生素A(Provitamin A)。其代表性物质就是胡萝卜素,胡萝卜素分为α-、β-、γ-三种异构体。其中β—胡萝卜素比较稳定,效力也强。纯净的产品为深红色或暗红色、有光泽的斜方六面体或结晶状粉末,对氧、热及光不稳定,是类胡萝卜素之一。
背景:某个品种中,β-胡萝卜素作为一个鉴别项目出现。
按照以前的做法,采用的是某国产的色谱柱(为了不必要的麻烦,隐去该色谱柱的厂家和型号),刚开始的时候,能出来比较不错的结果。但是样品放置一段时间后,β-胡萝卜素降解了,附近会出现降解杂质。
这个杂质的极性与β-胡萝卜素的极性比较相近,比较难分开。调整流动相的比例,效果不大。
查找资料说,有文献报道胡萝卜素的检测方法要用到C30柱,My God!
针对我们的品种,就是一个鉴别项目而已。也就是说,只要样品中的β-胡萝卜素能出峰,就能证明样品中含有β-胡萝卜素,而不是纠结于含量的多少。所以,就尝试着找一个能满足要求的色谱柱。
然后,就撞大运了。还真找到了博纳的一根柱子满足了要求。
色谱条件:Venusil XBP C18(L)色谱柱,4.6*150mm,5μm;Cat. :VX951505-L;S/N:V9520515BM0106
流动相:甲醇-乙腈(90:10);流速:2ml/min;波长:448nm;进样量:20μL。
供试品溶液:取适量样品,用乙醚和石油醚萃取。离心取上清液,即得。
对照品溶液:取对照品适量(中国药品生物制品检定所),用石油醚溶剂并稀释定容。然后再稀释成合理浓度,即得。
结果:
某国产色谱柱的色谱图:
博纳的色谱柱:
讨论:1. 同样的供试品溶液和对照品溶液,同样的流动相,两者的结果对比,差别太大了!!博纳的柱子,做出来的峰形很漂亮。赞一个!
2. 从近几天的实验结果看,色谱图可以满足要求。以后会怎样,需要更长时间的结果数据来支持。