仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
免疫沉淀反应(三)——对流免疫电泳实验
省部重点实验室
2013/09/24
私聊
生命科学仪器综合讨论
对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果,故可用于快速诊断,敏感性比双向扩散技术高10-15倍。
血清蛋白在pH8.6条件下带负电荷,所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷,而且它的分子量又较大(为r球蛋白)。所以游动慢。更重要的是抗体分子受电渗作用影响较大,也就是说点渗作用大于它本身的迁移率。所谓电渗作用是指在电场中溶液对于一个固定固体的相对移动。
琼脂是一种酸性物质,在碱性缓冲液中进行电泳,它带有负电荷,而与琼脂相接触的水溶液就带正电荷,这样的液体便向负极移动。抗体分子就是随着带正电荷的液体向负极移动的。而一般的蛋白质(如血清抗原)也受电渗作用的影响,使泳动速度减慢,但它的电泳迁移率远远大于电渗作用。这样抗原体就达到了定向对流,在两者相遇且比例合适时便形成肉眼可见的沉淀线。
一、材料
1. 诊断血清:免抗人免疫血清
2. 待检血清:人血清
3. 阴性对照血清
4. pH8.6、离子强度0.05 M 巴比妥缓冲液配方:巴比妥1.84 g,巴比妥钠10.3 g,加蒸馏水1000 ml,调pH至8.6。
5. 缓冲琼脂板:将纯化的琼脂用pH8.6离子强度0.025的巴比妥缓冲液(用0.05 M 的巴比妥缓冲液稀释一倍即可)配成1.5%的琼脂,加入0.01~0.02%流柳汞防腐,保存冰箱内备用。
6. 电泳仪
7. 其他:生理盐水、打孔器、微量进样器
二、方法
1. 琼脂板的制备根据需要可选用大玻板(6 cm×9 cm)和(小玻片)两种。大玻板约需琼脂10 ml,小玻片约需3.5 ml,凝固后按图打孔,方法同琼脂扩散实验。
2. 加样:左侧孔内加患者血清(原血清及10倍稀释血清各占一孔),右侧内加抗血清,每片应有阳性对照。
3. 电泳
用国产普通电泳仪。其内加0.05 m pH8.6的巴比妥缓冲液,加至电泳槽高度的三分之二处,注意两槽内液面尽量水平。将加好样品的玻板置于电泳槽上,抗原端接负极,抗体端接正极,用2~4层滤纸浸湿作盐桥,滤纸与琼脂板联接处为0.5 cm。以板宽度计算电流,以板的长度计算电压。要求电流量为2~3 mA/cm,即大板为20 mA,小板为10 mA。电压为4~6 V/cm。通电45分钟—2小时后观察结果。
4. 结果观察
在黑色背景上方,用散射光多个角度观察,在对孔之间有白色沉淀线即为阳性对照应出现明显的白色沉淀线。如果抗原,两极微沉淀条纹不清晰,于37℃保温数小时可增强沉淀条纹的清晰度。
5. 影响结果的因素
(1)抗原抗体的比例:抗原抗体比例适应时容易出现沉淀带,反之不易发生。当抗体浓度恒定时,被检血清含甲胎蛋白浓度高时,作10倍、20倍或更高倍数稀释可以提高阳性率。随稀释度的增加,抗原抗体的比例发生变化,沉淀线由靠近抗血清孔向逐步移向两孔中间,并可出现不典型的沉淀线如弧形、八字须形、斜线形,这些也是阳性,应予注意。
(2)组电泳缓冲液其电泳结果以巴比妥钠—盐酸缓冲液灵敏度最高。巴比妥—巴比妥钠次之,Tris缓冲液更差。
(3)电压与电流时电泳时间需要长些:电压电流增大时,电泳时间可更短。但电压过高则孔径变形,电流过大抗原抗体蛋白易变性,干扰实验结果。一般选择5 ml/cm,电泳时间改为1.5小时。
分
该帖子已被
版主-zhang8826857
加2积分,加2经验;加分理由:鼓励发帖交流
相关话题
1
五颜六色的采血管
2
人用肝素化采血管的质量控制
3
生气与疝气有关吗
4
硅胶假体-乳房植入物的安全性
5
仪器防爆是什么意思
近期热榜
赛默飞实验室产品焕新计划有奖调研!
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
报名开启:ICS2024第十三届光谱网络会议!
推荐收藏!盘点中药材及饮片检测解决方案
热门活动
甄选国优仪器,助推设备更新
采购咨询618活动:1000元奖励等你拿
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
实验室常用技术参数——常用酸碱技术参数
分享
2012/11/27
Science:未来新技能有望下载进大脑
讨论
2011/12/17
【预告】第六届 PCR技术 网络会议,重磅来袭!4天40余位专家精彩分享!
分享
2022/05/11
活体光学成像技术专栏| 活体成像中荧光蛋白的挑选指南
原创
2020/09/27
求助:毛细管
2006/09/19
LI-6400标准叶室测狭长叶及较小叶片的叶面积计算方法
原创
2012/12/04
【有奖问答】【趣味答题】
讨论
2012/06/14
生物化学名词解释大全 【精简版】
分享
2012/01/02
【我们不一YOUNG】HTS酶抑制剂筛选的流程介绍
分享
2024/07/05
太空微重力环境下癌症药物研究系统进口航空航天随机定位微重力模拟仪AJ001X
分享
2024/07/05
弱光成像或体内发光实验Atik TE科研制冷CCD相机
原创
2024/07/05
【我们不一YOUNG】结缘仪器,一起结缘,与仪器信息网一起成长
原创
2024/07/01
心血管检测仪打开后出现ch375dll.dll电脑丢失怎么办
已应助
2024/07/01
出售贝克曼DXC800生化分析系统
原创
2024/06/21
编织袋拉力机
原创
2024/06/14
求助贴: AKTA锯齿型洗脱曲线的解决办法
已应助
2024/06/02
实验室检测记录能否使用Excel保存
求助
2024/06/28
仪器点火失败
求助
2024/06/28
求助,非甲烷总烃测定中,除烃空气0.4mg/m3,怎么计算的呢?是按总烃计算公式吗?
求助
2024/06/29
检测报告一定要有判定结果吗?
求助
2024/07/01
求助安捷伦GC7890B,EPC无响应解决办法
求助
2024/07/01
气相FID重现性不好原因
求助
2024/07/01
HJ1332便携非甲实际应用问题
讨论
2024/07/01
衍射斑点标定求助
求助
2024/06/30
免疫沉淀反应(二)——琼脂扩散实验
分享
2013/09/24
哪些蔬菜能富集重金属?
求助
2013/09/24
免疫沉淀反应(一)——环状沉淀反应
分享
2013/09/24
En值与Z值是如何计算得出的?
咨询
2013/09/24
网络讲堂的视频如何下载?
原创
2013/09/24
扩大标准方法适用范围属于标准偏离吗
求助
2013/09/24
一款替代普通紫外和二极管阵列的检测器,大家怎么看?
讨论
2013/09/24
以下已处理举报帖子“【分享】禾川化学检测”
2013/09/24
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...