测定奶粉中泛酸为什么总是在5000左右啊

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高效液相色谱法测定奶粉中的泛酸

摘要：本文根据国家标准GB 5413.17-2010《婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定》，建立了利用我公司高效液相色谱LC-5500 测定奶粉中泛酸的方法：色谱柱：XBP-C18柱；流动相：甲醇（0.05mol/L）: KH2PO4=20:80;流速：1ml/min ;进样量：20μL；紫外检测器，波长200nm。柱温：30℃ ± 1℃。方法在1.0 μg/mL 到12.0 μg/mL之间线性良好，线性相关系数r≥0.999,泛酸的回收率在99.1% ～101.0%之间，RSD值≤2.69%。对客户提供的奶粉样品进行检查发现，泛酸含量均符合要求，有的样品中泛酸含量远高于标值。
关键词：LC-500高效液相色谱；泛酸；奶粉
从奶粉的三聚氰胺事件以来，国家对乳制品企业监测的要求越来越严格。2010年底至2011年初，国家质检总局对全国乳制品企业进行了集中检查。根据客户的需求，和相应的国家标准以及我们公司高效液相色谱的特点，对乳制品中允许和不允许加入的添加剂如三聚氰胺、山梨酸、苯甲酸、烟酸、牛磺酸、泛酸等的检测方法进行了优化。
泛酸又名维生素B3，因广泛存在于自然界故被名为泛酸。泛酸是由泛解酸和β-丙氨酸组成的一种化合物。泛酸主要生理功能作用是构成辅酶A和酰基载体蛋白，并通过他们在代谢中发挥作用。我国国标（GB10765,6,7-1997）中规定，婴幼儿配方奶粉中泛酸含量不得低于1500μg/100g（质量比）它是乳及乳制品中的重要的营养素之一。
1 实验材料与方法
1.1主要仪器
1.1.1 LC500高效液相色谱仪（HPLC）:配有紫外检测器（杭州旭昱科技有限公司）。
1.1.2 分析天平：感量为0.0001g（赛多利斯）。
1.1.3 超声波水浴（AS3120）。
1.1.4 pH计：精度为0.01。
1.1.5 滤膜：0.45μm。
仪器配置：
1.2 试剂
1.2.1甲醇：色谱纯。
1.2.2 盐酸：分析纯。
1.2.3 硫酸锌：分析纯。
1.2.4 盐酸（0.1mo1/L）：移取8.3mL盐酸于1000mL容量瓶中，用水定容。
1.2.5 硫酸锌溶液（15g/100mL）：称取15g硫酸锌用水溶解并定容至100mL。
1.2.6 磷酸二氢钾溶液（0.05mo1/L）：称取6.8g磷酸二氢钾，用水溶解并定容至1000mL。
用磷酸调节pH值至3.0，用0.45μm滤膜过滤。
1.2.7 泛酸标准储备溶液（1mg/mL）：准确称取泛酸钙1.087g，加水溶解并定容至1000mL。
（泛酸浓度=泛酸钙浓度X0.920）
1.2.8 泛酸标准中间液（0.1mg/mL）：吸取标准储备液5mL于50mL 容量瓶中，加水定容。
临用前配制。
1.2.9 泛酸标准的工作液的配制：分别准确吸取泛酸标准中间液1.0mL,2.0mL，4.0mL,8.0mL,12.0mL于100mL容量瓶中，加水定容至刻度，得到浓度分别为1.0μg/mL,2.0μg/mL,4.0μg/mL,8.0μg/mL,12.0μg/mL的泛酸标准工作液，临用前配制。
1.3 色谱条件
色谱柱：C18反相色谱柱（粒径5μm,250mmx4.6mm）。
流动相：取磷酸二氢钾溶液800mL，取甲醇200mL，混均后0.45μm微孔滤膜过滤。
流速：1.0mL/min。
检测波长：200nm。
柱温：30℃ ± 1℃。
进样量：20μL。
1.4 测定方法
1.4.1 样品处理
称取混合均匀的固态试样5g（精确至0.0001g）或液态试样约20g（精确至0.0001g）于150mL三角瓶中，固体试样加入约30 mL40 ℃～50 ℃温水，振摇溶解后超声萃取20min。（若样品中含有淀粉，称取样品后加入淀粉酶约0.2g，固体试样加入约30 mL 40 ℃ ～ 50 ℃温水振摇溶解，盖上瓶塞，在50 ℃～60 ℃条件下酶解30min。）
1.4.2 测定液的制备
试样溶液降至室温后，用0.1mo1盐酸调节pH至4.5±0.1，加入5mL硫酸锌溶液，充分混合。转入100mL容量瓶中，用水定容至刻度并充分混均后，用滤纸过滤。滤液经0.45μm
滤膜过滤后即为试样待测液。
1.4.3 测定
仪器条件设置好后，进标准溶液，根据峰高与浓度绘制标准曲线，根据保留时间定性，用外标法定量。
2 结果与讨论
2.1 流动相对样品分离结果的影响
采用了有关资料中介绍的流动相，V（甲醇）：V（KH2PO4)为1:9进行试样。结果证明，虽然在此条件下标准峰型比较好，但保留时间较长，并且样品中泛酸的吸收峰无法与样品中其他组分有效分离，说明在该配比的流动相不能用于测定乳制品中的泛酸。

2.3 回收率的测定
按照试验确定的方法，对检测方法进行了回收率的测定，结果如下表。有表一可知，泛酸的回收率在99.1% ～ 101.0%之间，说明在样品处理和测定过程中，泛酸的损失很小，检测方法可以应用于奶粉中泛酸钙的测定。
表一 泛酸回收率实验结果
样品 加标量（mg) 理论值（mg) 实测值（mg) 回收率（%）
加标1 0.20 0.57 0.573 100.5
加标2 0.40 0.77 0.778 101.0
加标3 0.80 1.17 1.159 99.1
2.4 精密度实验
称取4份样品，处理后分别进行测定，结果见表二。有表二可以看出，本方法测定乳制品中的泛酸具有较好的重现性，RSD值≤2.69%。并且由所得到的数据可知，所测定的客户提供的奶粉中泛酸的含量均符合要求，并且有的产品中泛酸含量远高于标示值。
表二 泛酸密度试验
测定次数 1 2 3 4 平均值 RSD（%）
泛酸含量（mg/100g） 5.03 4.92 4.67 4.85 4.87 2.69
3 结论
经试验得知，LC-500分析奶粉中泛酸的含量，流动相的比例V（甲醇）：V(KH2PO4)为2:8时，泛酸的保留时间合适，在6.8min左右，并且样品中泛酸峰与样品中其他组分能够有效的分离，且无溶剂峰飞干扰，在此条件下科满足测定乳制品中泛酸的含量要求。此方法在1.0μg/mL到12.0μg/mL之间线性良好，线性相关系数r=0.99977。此方法泛酸回收率与精密度实验结果较好，回收率在99.1% ～ 101.0%之间，RSD值≤ 2.69%。
综上所述，采用LC-500HPLC法测定乳制品中泛酸含量的方法是一较理想的方法。该法操作简便，易于掌握，因此可作为常规检测方法应用。本方法对客户提供的奶粉进行了测定，结果显示，奶粉中泛酸的含量均符合要求，并且有的奶粉中泛酸含量明显高于标示值。

样品处理没有问题吧，或者进样器问题

处理样 也没啥 问题啊 我是手动进样 柱子 不稳定？？

我们做的也是5000

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