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6 种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响
jiajia20
2014/01/21
私聊
仪器检定/校准/计量
6
种固定液短
时间
固定
对
冰
冻
切片制片效果影响
冰
冻
切片是一种在低温条件下使
组织
快速冷却到一定硬度,然后
进
行切片的方法。由于其制作
过
程
较
石蜡切片快捷、
简
便,而多
应
用于手
术
中的快速病理
诊
断。但在冰
冻
切片制
过
程中影响制片的
质
量因素
较
多,从而影响手
术
中的快速病理
诊
断。因此,快速制作一
张
高
质
量的冰
冻
切片
对
于确保病理
诊
断极其重要。
其中固定是冰
冻
切片制作中关
键
步
骤
之一,
对
切片的制片
质
量有着重要的影响。本文通
过
6种不同固定液短
时
固定
对
冰
冻
切片制片染色的比
较
,探
讨
不同固定液
对
冰
冻
切片制片效果的影响。
1
资
料与方法
1.1材料
选
自病理科手
术
切除的新
鲜组织标
本40例,包括有乳腺、甲状腺、胃、子
宫
、卵巢等
组织
。
1.2固定液
6种固定液分
别为
:10%福
尔马
林;95%酒精;AF固定液;丙
酮
∶甲醇∶乙
醚
酒精(乙
醚
∶酒精1∶1)。
1.3方法
1.3.1
取材及切片取材大小
为
1.5cm×1.5cm,厚2~3mm的新
鲜组织
,用OCT包埋
剂
包埋后,放
进
徕卡冰冻切片机
(温度-18℃~20℃),1~2min后,每例
标
本
连续
切片各6
张
,厚度4~5μm。
1.3.2
固定及染色切片后立即放
进
上述6种不同的固定液(室温20~25℃)固定6s。将固定
过
的切片用蒸
馏
水洗30s,放
进
改良的GILL
苏
木素液(
预
先放在65°恒温水域箱加
热
)2min,自来水洗,1%
盐
酸酒精分化液分化10s,温水(50℃)
蓝
化30s,伊
红
染色30s,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性
树
胶封片。2
结
果切片制作好后,通
过对
6种不同固定液的
对
比,在
显
微
镜
下
观
察切片的
组织
清晰度、
细
胞收
缩
度、
细
胞核染色、
细
胞
浆
染色、核
浆对
比情况。
结
果
见
表1。
表1 6种不同固定液的对比
固定液
组织清晰度
细胞收缩度
细胞核染色
细胞浆染色
核浆对比
10%福尔马林
差
细
胞
肿胀
差
差
差
AF液
稍差
轻度收缩
稍差
淡
差
95%酒精
较清晰
明显收缩
稍差
稍淡
稍差
丙酮
稍差
严重收缩
稍差
不均匀
差
甲醇
较清晰
轻度收缩
较好
较好
良好
乙醚酒精
清晰
正常
鲜艳
鲜艳
良好
1.3. 1 取材及切片取材大小为
1
. 5 cm × 1. 5 cm
,
厚2 ~ 3 mm 的新鲜组织
,
用OCT
包埋剂
包埋后
,
放进徕卡恒温冷冻切片机
(
温度-18°C ~ 20°C
)
,
1 ~ 2 min 后
,
每例标本连续切片各6 张 ,厚度 4 ~ 5 μ m 。
1.3. 2 固定及染色切片后立即放进上述 6种不同的固定液
(
室温20~ 25°C
)
固定6s。将固定过的切片用蒸馏水洗 30 s
,
放进改良的GILL苏木素液
(
预先放在65° 恒温水域箱加热
)
2 min
,
自来水洗,1%盐酸酒精分化液分化 10 s
,
温水
(
50°C
)
蓝化30 s
,
伊红染色30 s
,
梯度酒精脱水
,
二甲苯透明, 中性树胶封片。
2
结果
切片制作好后
,
通过对6种不同固定液的对比,在显微镜下观察切片的组织清晰度、细胞收缩度、细胞核染色、细胞浆染色、核浆对比情 况。结果见表 1 。
从观察结果显示
,
在 6 种固定液固定的冰冻切片中
,
经乙醚酒精固定后的冰冻切片
,
镜下组织细胞形态清晰
,
细胞无收缩
,
细胞核 、细胞浆染色鲜艳
,
核浆对比良好。甲醇固定的冰冻切片质量次之。95%酒精固定的切片
,
除细胞明显收缩外
,
组织结构较清晰,细胞染色尚可。丙酮和AF液固定的冰冻切片
,
组织结构较清晰度稍差
,
细胞浆染色及核浆对比均差, 而且丙酮固定的细胞收缩较为严重。10%福尔马林固定的冰冻
切片
组织清晰度、细胞核染色、细胞浆染色及核浆比均差
,
同时细胞肿胀
,
尤其是细胞核明显肿胀、模糊。
3
讨论
冰冻切片的目的是在短时间内作出准确的病理诊断
,
协助临床医生确定病变的范围
,
决定手术的范围
,
因此
,
必须尽一切可能争取时间
,
争取尽快早出切片
,
并保证质量
,
所以快速制作一张高质量的冰冻切片非常重要。中华医学会规定完成冰冻HE染色切片制备时间通常为20~25min
,
在冰冻切片制片中
,
固定液的选择及固定的时间长短是冰冻切片 HE染色的一个关键步骤。用于冰冻组织的固定液种类较多
,
大多数固定液需要固定几分钟至十几分钟时间
,
如果只固定数秒钟
,
则大多数切片固达不到诊断的要求。由于冰冻切片是由快速切片
,
快速固定
,
快速染色这三个方面相互影响所造成的
,
其中由于组织固定液因素影响组织细胞形态的改变
,
对病理医生的诊断影响最大
,
远比其他技术员操作因素引起的组织细胞形态改变更难把握。研究表明10%福尔马林虽然对组织的穿透力强
,
固定效果好
,
但需要固定的时间长
,
而且它不能抵消因冷冻所引起的细胞内液体的肿胀
,
所以甲醛固定的组织
,
核发生肿胀、模糊。从上述6种固定液的比较来看
,
如果只进行数秒钟的短时固定
,
10% 的福尔马林和AF 液固定的组织
,
组织清晰度差
,
细胞核和细胞浆着色较淡 ,核浆对比差。95% 酒精固定效果尚可
,
但细胞收缩明显
,
核浆着色稍差。丙酮固定剂
,
对组织穿透性强
,
但细胞严重收缩
,
核浆对比差。甲醇固定的组织
,
细胞轻度收缩性,组织结构清晰
,
核着色好。但是乙醚酒精固定液的冰冻切片能较好的保存细胞的正常结构
,
组织清晰
,
背景干净
,
细胞无收缩
,
核浆染色鲜艳
,
核浆对比良好,是 6种固定液中最好的。因此
,
乙醚酒精可以短时间内固定细胞
,
缩短制片时间
,
是一种较为理想的冰冻切片快速固定液。
分
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版主-刘彦刚
加10积分,加2经验;加分理由:谢谢分享!
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私聊
刘彦刚
第1楼
2014/01/21
应助达人
谢谢你给我们扫盲!这方面知识是我的盲区哦!
0
发表回复
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