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你注意到HPLC的延迟体积了吗

液相色谱(LC)

  • 延迟体积的概念是梯度混合点到柱头之间的管道体积,比如agilent四元泵,其延迟体积为比例阀到色谱柱柱头间的体积。因为存在延迟体积的存在,在运行梯度方法时,一开始会运行一段等度。因此,其可能会对分离度及保留造成影响,并进一步可能会对方法转移或验证造成影响。延迟体积越大,可能造成的影响也越大。但是延迟体积是一定存在的,agilent的一般可能达到500uL-1ml,岛津的可能要大些延迟体积的大小应该是HPLC的一个很重要的性能指标。

    最近我在开发一个HPLC的方法时,因为保留很弱,所以我尝试保持5%乙腈运行5min,期望能增加保留,结果是失望了,因为仪器延迟体积大,其保留只增加了0.5min,与我之前用agilent的一般能增加2min以上的情况大不一样。不知道还有坛友有类似的经历吗,大家一起交流交流。
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  • e_liang369

    第1楼2014/02/17

    液相检测室物质的保留时间不能靠仪器的死体积时间来调节,也没有太大意义。

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  • zhoujin83

    第2楼2014/02/17

    确实不能靠仪器的死体积来调整保留。但我这是说延迟体积,或者说是死体积的大小对保留和分离情况确实有影响。如果延迟体积太大,可能保留较弱的两个峰能达到基线分离,但是这个方法转移到延迟体积小的仪器上,就不一定能达到基线分离。从方法的可靠性上来说,延迟体积越小当然是越好。

    e_liang369(v2821515) 发表:液相检测室物质的保留时间不能靠仪器的死体积时间来调节,也没有太大意义。

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  • 老多_小多

    第3楼2014/02/17

    延迟体积其实是一个很重要的指标,很多厂家都在追求这个低标准

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  • zhoujin83

    第4楼2014/02/17

    是的。我现在用的这台shimadzu LC-20AT,不是专业人士安装的,延迟体积太大了,所用的管线加起来应该有1米长。

    老多_小多(emoc98311) 发表:延迟体积其实是一个很重要的指标,很多厂家都在追求这个低标准

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  • zhoujin83

    第5楼2014/02/17

    可惜我这边只有一台HPLC,要不我会把不同仪器上的图谱传上来。

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  • cdl1568

    第6楼2014/02/17

    延迟体积对在一台仪器上出的结果没有什么影响的,它在方法转移到不同品牌的仪器上时会有很大的影响,甚至会出现分不开的情况

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  • 老多_小多

    第7楼2014/02/18

    你说的也没错,这也是我们有些方法用不同的仪器无法重现的原因

    cdl1568(cdl1568) 发表:延迟体积对在一台仪器上出的结果没有什么影响的,它在方法转移到不同品牌的仪器上时会有很大的影响,甚至会出现分不开的情况

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  • tigertooth

    第8楼2014/02/19

    若果认为延迟体积那么重要,自己改管路呀,用更细内径更短的管子。

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  • 秦时明月

    第9楼2014/02/19

    其实影响延迟体积最主要是混合器的混合体积,管路的影响倒是其次(0.3内径的10cm也就7ul左右),岛津LC-20A以前标配的混合器是2.6ml,可以改1.7ml和0.5ml,这是老混合器。现在又出了20ul 40ul 100ul 180ul的高效混合器。

    zhoujin83(zhoujin83) 发表:延迟体积的概念是梯度混合点到柱头之间的管道体积,比如agilent四元泵,其延迟体积为比例阀到色谱柱柱头间的体积。因为存在延迟体积的存在,在运行梯度方法时,一开始会运行一段等度。因此,其可能会对分离度及保留造成影响,并进一步可能会对方法转移或验证造成影响。延迟体积越大,可能造成的影响也越大。但是延迟体积是一定存在的,agilent的一般可能达到500uL-1ml,岛津的可能要大些延迟体积的大小应该是HPLC的一个很重要的性能指标。

    最近我在开发一个HPLC的方法时,因为保留很弱,所以我尝试保持5%乙腈运行5min,期望能增加保留,结果是失望了,因为仪器延迟体积大,其保留只增加了0.5min,与我之前用agilent的一般能增加2min以上的情况大不一样。不知道还有坛友有类似的经历吗,大家一起交流交流。

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  • zhoujin83

    第10楼2014/02/19

    是这样的,我用的应该是老式的,很有可能是标配的2.6ml混合器。至于管线,虽然对延迟体积的贡献不大,但是我这个我再仔细看了看,其长度达到了2米啊,这就不小了。

    秦时明月(yelev1) 发表:其实影响延迟体积最主要是混合器的混合体积,管路的影响倒是其次(0.3内径的10cm也就7ul左右),岛津LC-20A以前标配的混合器是2.6ml,可以改1.7ml和0.5ml,这是老混合器。现在又出了20ul 40ul 100ul 180ul的高效混合器。

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