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液相色谱柱重要指标-理论塔板数

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  • 理论塔板数



    理论塔板数（theoretical plate number）N，色谱的柱效参数之一,用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。N取决于固定相的种类、性质（粒度、粒径分布等）、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。如果峰形对称并符合正态分布，N可近似表示为：

    理论塔板数=5.54(保留时间/半高峰宽)2 (2是平方)

    柱效率用理论塔板数定量地表示：N=16*（t/w ）2。其中，t是溶质从进样到最大洗脱峰出现的时间，w为该溶质的洗脱峰在基线处的宽度。在一色谱柱中用相同的洗脱条件时候，不同化合物的滞留时间与其洗脱峰宽度之比接近常数。因此理论塔板数大的色谱柱效率高。当然，N的大小和柱子长度有密切关系：理论塔板高度H=柱长/N，用H可以衡量单位长度的色谱柱的效率，H越小，则色谱柱效率越高。。。

    N为常量时，W随tR成正比例变化。在一张多组分色谱图上，如果各组份含量相当，则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽，峰高则逐渐降低。

    用半峰宽计算理论塔板数比用峰宽计算更为方便和常用，因为半峰宽更容易准确测定，尤其是对稍有拖尾的峰。

    N与柱长成正比，柱越长，N越大。用N表示柱效时应注明柱长，，如果未注明，则表示柱长为1米时的理论塔板数。（一般HPLC柱的N在1000以上。）

    若用调整保留时间（tR’）计算理论塔板数，所得值称为有效理论塔板数（N有效或Neff）=16(tR’/W)2

    处理方法

    理论塔板数下降后可以考虑色谱柱再生

    反相柱

    分别用甲醇:水=90:10,纯甲醇（HPLC级）,异丙醇（HPLC级）,二氯甲烷（HPLC级）等溶剂作为流动相,依次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积.然后再以相反的次序冲洗.

    正相柱

    分别用正己烷（HPLC级）,异丙醇（HPLC级）,二氯甲烷（HPLC级）,甲醇（HPLC级）等溶剂做流动相,顺次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于20倍的柱体积(异丙醇粘度大,可降低流速,避免压力过高).注意使用溶剂的次序不要颠倒,用甲醇冲洗完后,再以相反的次序冲洗至正己烷.所有的流动相必须严格脱水.

    离子交换柱

    长时间在缓冲溶液中使用和进样,将导致色谱柱离子交换能力下降,.用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生,反之,用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生.

    另外,还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗.但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的.

    如果柱子装反了,可以调回来,但可能会造成柱内担体塌陷.在不得已的情况下尽量不要反装色谱柱.
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  • dahua1981

    第1楼2014/04/14

    应助达人

    基本概念需要掌握

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  • houjjun

    第2楼2014/04/14

    做色谱应该了解下

    dahua1981(dahua1981) 发表:基本概念需要掌握

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  • ECHO007

    第3楼2014/04/14

    补充下相关理论。

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  • 三人行

    第4楼2014/04/14

    理论塔板数代表色谱柱的分离效果。与色谱柱本身有关，也与工作条件有关，比如流速\柱温度\流动相的配比\流动相的ph值\进样量的多少等因素都有关系。如果达不到的话可以调节以上参数，直到达到要求为止。

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  • dahua1981

    第5楼2014/04/15

    应助达人

    这是必须的

    houjjun(houjjun) 发表:做色谱应该了解下

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  • houjjun

    第6楼2014/04/15

    是这样

    三人行(jncxyy2012) 发表:理论塔板数代表色谱柱的分离效果。与色谱柱本身有关，也与工作条件有关，比如流速\柱温度\流动相的配比\流动相的ph值\进样量的多少等因素都有关系。如果达不到的话可以调节以上参数，直到达到要求为止。

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  • 三人行

    第7楼2014/04/15

    如果达不到要求就要换色谱柱。

    houjjun(houjjun) 发表:是这样

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  • houjjun

    第8楼2014/04/15

    色谱柱起作用作用

    三人行(jncxyy2012) 发表:如果达不到要求就要换色谱柱。

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  • 御风飘逝

    第9楼2014/04/16

    这是最基础的色谱知识了

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  • 御风飘逝

    第10楼2014/04/29

    理论塔板数还是一个比较重要的指标呢。

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