nphfm2009 2014/06/04
具体可参见我的这篇原创:效果很好的 [url]http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20140601/5332588/[/url]
sukiliang 2014/06/03
加入内标即可,回收率都能达到95%
吕梁山 2014/06/10
我看见别人处理过,很麻烦的
冰火女孩 2014/06/10
提取步骤 称取5g已捣碎的样品于50ml离心管中,加入8ml乙酸钠缓冲液,充分混匀,再加50µLβ-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶,混匀后,37度环境下酶解12h。添加100µL的10ng/mL内标工作液于待测样品中, 加盖置于水平振荡器上振荡15min,离心10min(5000r/min ),取4mL上清液加高氯酸调节pH值到1土0.3。5000r/min离心10min后,将全部上清夜转移到50ml的离心管中,用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11。加入10mL饱和氯化钠溶液和10ml异丙醇-乙酸乙酯(6+4)混合溶液,充分提取,在5000r/min下离心10min。转移全部有机相,在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液,超声混匀,使残渣充分溶解后备用。将阳离子交换固相萃取小柱连接到真空过柱装置,然后将上述残渣溶液上柱,依次用5mL水、5mL的2%甲酸水溶液和5mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干,最后用5mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入1ml的0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95/5),超声混匀。用0.22微孔滤膜过滤,上[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS进行分析。 SPE净化步骤净化 SPE柱:Welchrom® P-SCX,60mg/3mL a 活化:依次加入5mL 甲醇和5mL水,流出液弃去; b 上样:将提取液加入Welchrom® P-SCX柱中,流出液弃去; c 淋洗:依次用5mL水,5mL 2%甲酸水溶液和5mL甲醇淋洗,淋洗液弃去; d 洗脱:6mL 5%氨水甲醇溶液洗脱,收集洗脱液; e 重新溶解:50ºC下氮气吹干洗脱液,准确定容至1mL后用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS进行分析。
nphfm2009
第4楼2014/06/04
具体可参见我的这篇原创:效果很好的
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20140601/5332588/
冰火女孩
第6楼2014/06/10
提取步骤
称取5g已捣碎的样品于50ml离心管中,加入8ml乙酸钠缓冲液,充分混匀,再加50µLβ-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶,混匀后,37度环境下酶解12h。添加100µL的10ng/mL内标工作液于待测样品中, 加盖置于水平振荡器上振荡15min,离心10min(5000r/min ),取4mL上清液加高氯酸调节pH值到1土0.3。5000r/min离心10min后,将全部上清夜转移到50ml的离心管中,用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11。加入10mL饱和氯化钠溶液和10ml异丙醇-乙酸乙酯(6+4)混合溶液,充分提取,在5000r/min下离心10min。转移全部有机相,在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液,超声混匀,使残渣充分溶解后备用。将阳离子交换固相萃取小柱连接到真空过柱装置,然后将上述残渣溶液上柱,依次用5mL水、5mL的2%甲酸水溶液和5mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干,最后用5mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入1ml的0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95/5),超声混匀。用0.22微孔滤膜过滤,上LC-MS/MS进行分析。
SPE净化步骤净化
SPE柱:Welchrom® P-SCX,60mg/3mL
a 活化:依次加入5mL 甲醇和5mL水,流出液弃去;
b 上样:将提取液加入Welchrom® P-SCX柱中,流出液弃去;
c 淋洗:依次用5mL水,5mL 2%甲酸水溶液和5mL甲醇淋洗,淋洗液弃去;
d 洗脱:6mL 5%氨水甲醇溶液洗脱,收集洗脱液;
e 重新溶解:50ºC下氮气吹干洗脱液,准确定容至1mL后用LC-MS/MS进行分析。