[生活中仪器分析]农药残留速测仪的验证

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2014/08/03

私聊

农残检测

农药残留速测仪的验证

摘要：

农产品检测多以检测蔬菜中农药残留居多，实验室里要用气相色谱或液相色谱来对农药残留，进行定性与定量检测，而在农产品批发市场或生产基地，多采用快速检测仪器来检测，这些农药残留速测仪操作简单，成本较低，可对大量样品加以筛选定性，但是如何规范快速检测操作，保证快速检测工作质量，我们开展了速测仪的验证工作。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

河南农大迅捷公司生产的农药残留检测仪，吉大·小天鹅农药残留快速检测仪；石家庄农残试剂，广州某农残试剂。

1.2实验方法

按照GB/T5009.199-2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》酶抑制率法(分光光度法)方法检测。

1.3样品的预处理

样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL提取液，振荡1min∽2min，倒出提取液，静置3min∽5min，待用。

对照溶液测试：先于试管中加入2.5mL提取液，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀的于37℃放置15min以上。加入0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化值。

样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其他操作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值。

2 结果与讨论

2.1、同一台仪器之间的验证

同一台仪器之间的验证工作，是多名检验人员用统一的样品和速测试剂，对同一台速测仪器进行操作。仪器的六个通道的误差如果维持在10%以内，这说明仪器的稳定性较好，如果通道之间误差较大，说明仪器有问题可返回厂家维修。

称取样品10.0g，加入50mL提取液，振荡1min∽2min，吸取提取液2.5mL，同时做对照测试，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀的于37℃放置15min以上。加入0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化值。

用这种方法验证同一型号的速测仪，发现6号速测仪通道误差较大，返回厂家维修。

2.2、多台仪器之间的验证

多台仪器之间的验证就是一名检测人员用统一的样品和速测试剂在多台不同型号的速测仪上同时检测，按照同一台仪器的操作规范进行，多台仪器之间的误差也都可以保持在15%以内。

2.3、不同人员之间的验证

不同人员之间的验证就是多名检测人员使用统一的样品操作同一台或多台速测仪进行验证。实验证明，在检测人员的规范操作的前提下，多名人员之间的验证数据误差也都在规定的范围之内。

2.4、不同速测试剂的验证

分别用了石家庄某试剂和广州绿健农残速测试剂，测试了酶试剂的活性。酶试剂活性试验：

于试管中加入2.5mL提取液，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀的于37℃放置15min以上。加入0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化值。如果空白吸光度ΔA0值在0.3以上，即可往下操作，如果ΔA0值小于0.3，有可能是酶活性不够。

可以看出广州的酶试剂活性较好。

2.5、不同水浴温度的验证

当水浴温度升高时，酶与底物的反应速率加快，酶活性增大，验证时将水浴温度分别设为30℃与37℃，进行空白试剂的吸光度试验，同时进行加入同浓度的标液进行测试，30℃抑制率明显低于37℃，这说明酶的活性只有在一定温度下才能体现出来。

2.5.1空白试验

于试管中加入3.1mL提取液，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀的分别于30℃与37℃放置15min以上。加入0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化值。

2.5.2加标试验

所用标液是农业部环境保护科研监测所提供，敌敌畏标液100ug/mL，将基稀释至10ug/mL，吸320uL到10g菜样中，加50mL提取液中，混匀，吸3.1mL提取液到每个试管，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀的分别于30℃与37℃放置15min以上。加入0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化值。

2.6、不同量的浸提剂的验证

浸提剂的多少对检测结果有直接影响，不同的试剂厂家生产的试剂，要求吸取的浸提剂不同，试验表明，使用同一厂家的试剂，加入同一浓度的标液，从三角瓶吸取浸提液，分别吸取3.1mL与2.5mL浸提剂，进行检测，3.1mL明显比2.5mL抑制率要高，所以使用试剂时，要认真阅读试剂说明书，严格按试剂说明书来操作，否则会造成抑制率升高。

2.7、添加农药标液的验证

根据《GB/T5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》和食品安全国家标准食品中农药残留最大限量》（GB2763-2014）相关规定，我们做了敌敌畏农药标准品的添加试验，敌敌畏标液100ug/mL，将其稀释至10ug/mL，吸100uL到10g菜样中，添加量为0.1mg/kg，加50mL提取液中，混匀，吸3.1mL提取液到每个试管，再加入0.1mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀的分别于30℃与37℃放置15min以上。加入0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化值。

根据《GB/T5009.199-2003》规定，敌敌畏的检出限为0.1mg/kg。广州某试剂厂的农残试剂在添加该浓度时可检出，符合要求。

3结论

1、仪器

几台速测仪可正常使用，仪器各通道与仪器之间的误差10%以内。误差大于10%应该及时返回厂家维修。

2、试剂

经验证，广州某试剂的酶活性在国家规定的范围内，加入敌敌畏标液时，对乙酰胆碱碱酯酶的抑制作用比较明显，能够在敌敌畏的检出限时检出。建议使用该厂试剂作为速测检测试剂。

3、温度

结果表明：水浴温度在25℃∽37℃之间时，随水浴温度的增大，酶活性增大；达到37℃时酶活性最大，这说明酶的催化作用，只有在一定温度下才能体现出来，建议选择水浴温度为37℃。

4、移液枪

准确吸取2.5mL浸提剂对检测结果有一定影响，验证过程中发现移液枪老化，吸液时有漏液与吸量不准确的情况，建议购买新的移液枪，以保证吸取时的准确度。

5、人员

人员操作不规范，比如吸取2.5mL浸提剂时，不用移液枪，直接倒入小瓶，小瓶里的浸提剂数量不精确，直接影响检测结果；又如不会正确使用移液枪，吸取时过量，导致通道之间误差大于15%，建议全体人员进行规范化操作培训，练习及考核，以达到人人过关。

参考文献

[1] 中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会发布，GB/T5009.199-2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》-北京：2004 571-573

[2]中华人民共和国国家卫生与计划生育委员会中华人民共和国农业部《食品安全国家标准食品中农药残留最大限量》（GB2763-2014） 2014 41