不同基质中16种邻苯二甲酸酯类检测系统解决方案

博纳艾杰尔

2014/08/19

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一、样品前处理方法

1.1水性样品（水、饮料、果汁等）

固相萃取柱：Cleanert DEHP玻璃柱，500mg/6mL，P/N:DEHP5006

1）样品处理

此类样品包括瓶装纯净水、矿泉水，茶、果汁和功能饮料等；某些可水溶解的固体样品可以先制成水溶液，然后全部作为待处理液，如无脂糖果。

2）固相萃取法净化

活化：5mL 乙酸乙酯、5mL甲醇、5mL水

上样：10mL水性样品

淋洗：5mL 5%甲醇水，真空抽干20min。

洗脱：加入2mL甲醇浸泡柱床约1min，再用10mL乙酸乙酯进行洗脱。

检测：将洗脱液用氮气吹干后，以1mL甲醇定容，然后用液相色谱法检测。

备注：此法多适用于配套液相色谱检测，当样品中邻苯二甲酸酯类的含量较低时，需要采用固相萃取富集才能检测的情况。

一般来说，对于此类样品，可以采用正己烷液液萃取的办法，用gc/MS（灵敏度较高）直接检测。

注：所使用乙酸乙酯必须是农残级。

1.2 白酒

固相萃取材料：Cleanert DEHP玻璃柱，500mg/6mL，P/N:DEHP5006

1）样品制备：

将白酒用去离子水稀释，使其中的乙醇的含量为5%，作为上样液；取1 mL甲醇加入19 mL去离子水，混匀，得到5%甲醇-水溶液，作为淋洗液。

2）净化

用玻璃移液管分别取5 mL乙酸乙酯、5 mL甲醇，5 mL水，在重力状态下依次过柱；用玻璃移液管取100 mL上样液加到小柱上；用玻璃移液管取5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗固相萃取柱；淋洗结束之后，开启真空泵抽20 min，抽干之后，加入2 mL甲醇浸泡柱床约1 min；用10 mL乙酸乙酯洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。将洗脱液于35℃氮吹至干，用1 mL甲醇定容，将溶液转移至样品瓶中，进行gc/MS或HPLC检测。

注：所使用乙酸乙酯必须是农残级。

1.3 乳品及乳制品饮料等含蛋白基质样品

固相萃取材料：Cleanert MAS-PAE，40mL玻璃散装填料（P/N：MS-PAE40）

n 纯牛奶样品：

样品净化：向玻璃离心管中加入2mL样品，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基谜（9:1，V/V），将离心管涡旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAE填料，再将离心管涡旋振荡2min后，以7000rpm的转速离心5min，取上清液，以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后，待检。

n 酸奶样品：

样品净化：向玻璃离心管中加入1mL酸奶和1mL去离子水，混匀，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基谜（9:1，V/V），将离心管涡旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAE填料，再将离心管涡旋振荡2min后，以7000rpm的转速离心5min，取上清液，以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后，待检。

1.4酱油

固相萃取材料：Cleanert MAS-PAE-C，40mL玻璃散装填料（P/N：MS-PAE40-C）

样品净化：

向玻璃离心管中加入2mL样品，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基谜（9:1，V/V），将离心管涡旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAE-C填料，再将离心管涡旋振荡2min后，以4000rpm的转速离心5min，取上清液，以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后，待检。

1.5油性样品

方法一：内部方法

固相萃取柱：Cleanert PAE-G玻璃柱，3g/6mL（P/N：PAE30006-G）

1）样品制备：

用万分之一天平称取0.1g油，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至另一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入2mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。

2）固相萃取方法：

活化： 5mL正己烷

上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中

淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷

洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷

收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进gc/MS检测。

注：所使用乙酸乙酯必须是农残级。

方法二、SN/T 3147-2012

固相萃取柱：Cleanert PSA玻璃柱，1g/6mL（P/N：PA00006-G）

1）样品制备

称取1.0 g样品于玻璃离心管中，加入2 mL正己烷和10 mL乙腈，涡旋2 min，以4000 r/m离心2 min，转移下层清液转移至另一样品瓶中，以10 mL乙腈重复提取样品一次，合并提取液，40 ℃氮气吹至近干，加入2 mL正己烷复溶作为待净化液。

2）净化

活化：将Cleanert PSA玻璃固相萃取柱用5mL丙酮、5mL正己烷活化

上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中；

洗脱：用5mL 正己烷，然后用5mL 4%丙酮—正己烷溶剂洗脱，合并洗脱液

收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈溶解，进HPLC检测。

1.6 复杂基质样品（如方便面填料包）

固相萃取柱：Cleanert PAE-C玻璃柱，1g/6mL（P/N：PAE30006-C）

1）样品制备：

用万分之一天平取0.5g调料，置于玻璃样品瓶中，加入3mL乙腈/甲基叔丁基醚（9:1，v/v），涡旋2min，超声2min，以4000r/m离心2min，将上清液转移至另一干净样品瓶中，往装调料的样品瓶中再加入3mL乙腈/甲基叔丁基醚（9:1，v/v），涡旋2min，超声2min，以4000r/m离心2min，将上清液合并，于40℃氮气吹干，加入1mL正己烷，摇匀，作为待净化液。

2）样品净化：

活化：5mL正己烷

上样：全部待净化液

淋洗： 10mL 1%乙酸乙酯/正己烷（v/v）

洗脱：5mL乙酸乙酯：正己烷（50:50，v/v）

将洗脱液于40℃下氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋混合1min，超声1min，4000r/m离心3min，转移上清液至进样样品瓶中，待检测。

注：所使用乙酸乙酯必须是农残级。

二、检测方法

2.1 高效液相色谱法

色谱条件

色谱柱：Venusil XBP C18-L ，4.6×250 mm，5 μm，150Å（P/N：VX952505-L）；

流动相：A相-水，B相-甲醇:乙腈=50:50 (v/v)

流速：1.0 mL/min；

波长：242 nm

进样量：5 μL（样品浓度100ppm），50μL（样品浓度10ppm）；

溶剂：正己烷/流动相A+流动相B（40+60）；

柱温：30℃

梯度洗脱：见表1

表1. 液相色谱梯度洗脱条件

时间/min	A/%	B/%
0	60	40
2	50	50
10	40	60
12	30	70
20	30	70
31	0	100
40	0	100
40.01	60	40

图1. 16种邻苯二甲酸酯类标准品HPLC色谱图（样品浓度为25 ppm）

（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二苯酯，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二己酯DHXP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二辛酯DNOP，邻苯二甲酸二壬酯DNP）

2.2 气相色谱质谱法

1）气相色谱条件

色谱柱：DA-5MS（30m*0.25mm*0.25μm）；

进样口：250℃，不分流进样；

进样量：1 μL；

程序升温：50℃（1 min）20℃/min 220℃（1 min）5℃/min 280℃（4 min）；流速：1 mL/min

2）质谱条件

接口温度：280℃；电离方式：EI；电离能量：70 eV；溶剂延迟：7 min；监测方式：SIM模式，监测离子见表2。

表2. 16种邻苯二甲酸酯类化合物定量离子及定性离子

编号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定性离子
1	8.258	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.128	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	10.889	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.637	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	11.97	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.728	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.051	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.418	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.568	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.726	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.169	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	17.843	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.073	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.207	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.481	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.023	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

图2. 白酒中16种邻苯二甲酸酯类样品加标100 ppb gc-MS谱图

（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二苯酯，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二己酯DHXP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二辛酯DNOP，邻苯二甲酸二壬酯DNP）

三、订货信息

产品名称	订货号	说明	规格	包装（支/盒）	价格(元)
Cleanert PAE 增塑剂系列专用柱	DEHP5006	用于水、饮料等样品	500mg/6mL	30	1140
	MS-PAE40	乳品及乳制品饮料等	40mL玻璃样品瓶	15	300
	MS-PAE40-C	酱油等复杂水性样品	40mL玻璃样品瓶	15	390
	PAE30006-G	油性样品	3g/6mL	30	1200
	PAE30006-C	复杂油性样品如方便面调料包、火锅底料等	3g/6mL	30	1440
	PA0006-G	适用于SN/T 3147-2012	1g/6mL	30	1380
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