高效液相色谱法检测女贞子药材中女贞苷含量
药材女贞子为木樨科植物,具有滋肝肾、明目黑发,也可治疗眩晕耳鸣、腰膝酸软等症状。其中女贞苷是女贞子中重要成分之一。相应饮片和药材都要求检测女贞苷含量。
以下的方法采用的是高效液相色谱法,检测的是女贞子药材中女贞苷含量。
实验部分
原理
取适量样品粉碎、溶解、超声提取、定容、滤过,由进样系统进样,色谱柱分离,紫外检测器检测,保留时间定性,峰面积定量计算。
仪器及试剂
仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器),超声波清洗仪,粉碎设备,三号筛,电子天平,具塞锥形瓶,溶解过滤器,针筒式过滤器
试剂:甲醇(色谱纯),超纯水,稀乙醇
样品制备
对照品溶液的制备:精密称取女贞苷对照品12.5mg于50ml容量瓶中,加甲醇制成0.25mg/ml女贞苷溶液,备用。
供试品溶液的制备:取女贞子药材样品适量,充分粉碎后过三号筛,准确称取过筛后的粉末0.5g,置于具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇50ml,称定重量,超声波超声30min,待样品完全溶解后,放冷,再称定重量,用稀乙醇补充减少的重量,摇匀,微膜滤过,待测。
色谱条件
检测器:紫外检测器
色谱柱:C18,4.6 X 250mm,5um
波长:224nm
流动相:甲醇:水=40:60(V:V)
流速:1.0ml/min
柱温:30℃
进样量:5ul
对照品溶液色谱图:
供试品溶液色谱图:
看看这效果,很羡慕吧,峰形、分离度都很完美吧。
该方法检测女贞子药材中女贞苷含量操作简单、方便,实验快速,结果准确、可靠,是一种坚持女贞子的好方法。
注意的是样品前处理时如果取样量较大或样品粉碎的不够充分,样品提取时可能不能提取完全。那样的话一是样品量要适中,不要太多;二是样品粉碎的要尽量充分;三是超声波提取时间要适当长一些,或提取时温度湿度高一点,或分成几次或几批提取等。
另外这个样品杂质和目标物干扰物都较少,检测时可以适当考虑下缩短检测时间的问题,比如适当增加流动相中甲醇含量,适当升高色谱柱温度控制等。下面我们就看看流动相甲醇:水=50:50,柱温40℃的效果吧。
对照品溶液色谱图:
供试品溶液色谱图:
效果很好吧,这种方法我们在检测时是不是可以考虑下。哈哈,经验之谈,祝大家工作顺利,天天开心!