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HPLC能完美解决弱碱性化合物的液相色谱柱

jiayanpeng0

2014/10/24

试剂/耗材采购

给大家推荐一款能完美解决弱碱性化合物的色谱柱，华谱XCharge液相色谱柱。以下是他的介绍，各位可以了解一下，遇到问题也多一种选择。

XCharge C18是基于对碱性化合物的独特色谱保留行为的深入理解而开发的一款独特的色谱柱。由于设计理念不同，与传统的反相色谱柱在色谱方法开发上有很大的不同，需要色谱工作者首先对其设计理念有一定了解，才能为您的方法开发带来更轻松的体验。

1.一般而言，选择0.1%甲酸作为流动相添加剂(即0.1%甲酸水和0.1%甲酸乙腈等)，调节有机相浓度，可解决大部分碱性化合物的峰形问题。不过需要注意的是，由于该色谱柱采用电荷排斥屏蔽高能吸附位点，对碱性化合物的保留相比传统反相柱要弱一些，故在有机相浓度上相比传统方法要低一些，XCharge C18是耐纯水相的反相色谱柱，故有机相起点可以低至0%。

2.具体方法开发时可以首先使用5%有机相-15min-35%有机相-10min-95%有机相的梯度方法对样品在XCharge C18上的保留情况快速做一判断。在此条件下，若使用乙腈为有机相，多数碱性化合物的保留时间会在5~15min之间，可以通过5%~35%的有机相比例微调得到合适的保留和分离；若保留在15~25min之间，则起始有机相浓度可以提高到30%以上，进行有机相梯度调整，得到合适的保留和分离；

（注：在XCharge C18上乙腈的峰形比甲醇好很多，建议使用乙腈开发方法）

3.对于2中方法不能很好实现峰形或分离的情况，大致有以下几种难点情况：

1)保留时间不够及其引起的峰形前伸，分离度不足：

多见于分子量小于300的低分子量碱性化合物。这些化合物本身在反相上保留较弱，又由于XCharge C18屏蔽了高能位点的吸附，并对碱性溶质有排斥作用，保留进一步削弱，是XCharge C18分离碱性化合物的主要难点。解决方案有：1.纯水相起步尝试0%有机相-10min-0%有机相-10min-10%有机相的梯度，看能不能得到合适的保留和分离；2. 若1的保留仍不够，将0.1%的甲酸添加剂换成0.1%~0.5%的三氟醋酸（TFA，添加越多，保留可能越增强，当然增强幅度有限，尽量少点），利用TFA的弱离子对试剂性质增强碱的保留和选择性，仍可使用1中所述梯度。（注：TFA在低波长下干扰小，若样品在190~220nm检测，则甲酸不合适，TFA为首选添加剂）。3. 若2仍不行，可尝试添加10~20mM的磷酸二氢钠/钾等缓冲盐（pH 2~4）, 或者高氯酸钠，特别是高氯酸钠的效果会很显著。

2)保留时间够但分离度不够

有时虽然样品的保留足够，但因为相似化合物的分离选择性不够而出现分离度不够的问题，同样可以从流动相梯度，添加剂种类方面去改善。具体而言，解决方案同有：1. 流动相梯度调缓；2. 甲酸换成三氟醋酸；3. 尝试添加10~20mM的磷酸二氢钠/钾等缓冲盐（pH 2~4）, 或者高氯酸钠，特别是高氯酸钠的效果会很显著；4. 若上述方法均无法达到目的，可以经与技术人员的协商后，看能不能尝试XCharge C18PN；（XCharge C18PN同样是一款电荷修饰的反相柱，不同的是聚合了不同的极性基团，对XCharge C18的分离选择性可以起到很好的补充）

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fanchuangang

第1楼2014/10/25

谢谢分享，不失为解决问题的一条途径，有免费试用就好了

0

vm88

第2楼2014/10/25

根据柱子来决定前处理的方法，真是一种创新呀。

0

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