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【资料】色谱柱的平衡和使用

hongmiao

2006/09/16

液相色谱（LC）

色谱柱的平衡和使用
反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇（或乙腈）/水中的。请一定确保您所使用的流动相和甲醇（或乙腈）/水互溶，由于色谱柱在运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱：如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用含水量很高（约95%）的流动相过渡，样品分析完后，冲洗柱子是亦然。过去传统的方法使用纯水冲洗，对于非极性柱，如C8或C18，由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链，造成柱效下降。另外，分析样品时，由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜，出现样品不保留而分不开，重现性差，所以对于一般的C18或C8，有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙腈的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。
如何平衡色谱柱。
平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低，则需要较长的时间平衡）。
色谱柱的再生
建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱规格柱体积溶剂体积
150×4.6 2.50ml 50ml
250×4.6 5.0ml 100ml
250×10 20ml 400ml
请根据下表选择您的再生方法:
极性固定相(如Si，NH2，Diol色谱填料)的再生：正庚烷—氯仿—乙酸乙酯—丙酮—乙醇—水
非极性固定相（如反向填料C18，C8等）的再生：水—乙腈—氯仿（或异丙醇）—乙腈—水

色谱柱的维护
1、使用保护柱
2、大多数柱的PH稳定范围是2-7.5，尽可能在此范围内使用
3、避免流动相组成及极性有剧烈变化
4、流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5、如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，要在实验完毕将柱子冲洗干净
6、压力升高时更换保护柱

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第1楼2006/09/16

多谢!以前还不知道这些呢

0

21wangxiyu

第2楼2006/09/16

是啊，以前我也不知道啊，谢谢啊

0

ycjlzxj1

第3楼2006/09/17

好人！！我又涨知识了！！1

0

ycjlzxj

第4楼2006/09/17

真的不错！！的确要这样。

0

neon

第5楼2006/09/17

谢谢楼主分享

0

rongji

第6楼2006/09/22

请问
C18柱具体的平衡过程怎末样的
是不是不能用纯水过度啊?
另外如果流动相含有缓冲盐,C18柱在清洗过程中能不能用水冲洗?
谢谢!

0

何日しovの卿归

第7楼2006/09/22

0

wsy18

第8楼2006/09/22

可以下载这个帖子参考：
[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱柱的选择与使用[/url]

rongji 发表:请问
C18柱具体的平衡过程怎末样的
是不是不能用纯水过度啊?
另外如果流动相含有缓冲盐,C18柱在清洗过程中能不能用水冲洗?
谢谢!

0

tdcool

第9楼2006/09/22

c18柱不要用纯水冲，会把柱子冲塌的

0

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