毛细管电泳(CE)
nini2006
第1楼2015/02/03
如果光是检测,做的还是很多的。请参考下帖中第1部分第24份资料:http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120831/4218338/但是回收的话,可能有点难度。
lingyou
第2楼2015/02/03
级别太低不能查看精华帖,哭
第3楼2015/02/03
试试这个链接:http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20140721/5389364/
第4楼2015/02/03
这个我看过啦,我用的也是beckman试剂盒,做CE-SDS没问题。现在问题是CIEF峰太多太杂,所以希望能有方法把单抗轻重链分离后分别CIEF检测,能降低谱图分析的复杂性。不知道我描述的是不是清楚
CEcret
第5楼2015/02/03
有几点说明的:1。cIEF分离的是charged variants,你获得10个以上的峰都很正常,因为抗体的修饰本来就很多。你把轻重链分开后分别检测,至少重链的修饰还是很多。2。电泳的CE-SDS可以分离轻重链,但是受进样量限制,你收集的量远不足以再次分析,且含有SDS和polymer的基质也不利于cIEF分析。3。我能够想到的办法,采用SEC手段(这样能够保有蛋白不变性)分离HC,LC,分别收集后进行cIEF分析,这中间你还需要超滤脱盐。不知道是不是对你有所帮助。
第6楼2015/02/03
SEC的方法实验过了,问题在于单抗用巯基乙醇处理后HPLC检测发现出现了非常高的聚体峰,也就是二硫键又重新组合了,导致轻重链含量很低。想加碘乙酰胺封闭二硫键,结果出现了沉淀。所以想问各位大神有没有其他的方法,试剂盒最好啦!新手,基础知识储备不足
第7楼2015/02/03
你如果是要回复上面的发言,可以点击该回帖所在楼层的“回复本帖”按钮,这样,他在下次登录的时候就能收到提醒,利于及时跟进。
第8楼2015/02/03
所以你目前的问题不是如何分离,而是如何防止抗体聚集。既然你分离后还要收集,建议你不要用CE了。还是用SEC吧,把聚集问题解决了就好了。
第9楼2015/02/04
谢谢指导
第10楼2015/02/04
对的,现在就是想要一个能够还原单抗还不会产生聚体的有效方法,巯基乙醇加碘乙酰胺很经典可惜不适用
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