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请高手求教,标品和样品加标两者保留时间差距大,出峰不在同一位置

液相色谱(LC)

  • 如标题 做西葫芦的 灭蝇胺 NY/T 1275-2009
    色谱柱 waters刚买不久的氨基色谱柱;流动相:乙腈-水(98+2);流速:0.5ml/min; 进样:20ul; 紫外检测器波长:215nm;柱温:35度,
    跟标准有些微区别,优化了些,因标准中出峰太靠前,
    问题: 已经连着做了两天,标品出的峰很好,但加标出的峰保留时间和标品差的很大
    再下如图:
    标准曲线:0.1、0.3、0.5 ug/ml

    样品(西葫芦)图谱:

    给上面样品的进样小瓶中直接加了标样大概在0.5ug/ml,保留时间差了,不知什么原因?

    样品加标:进样小瓶中应为0.4ug/ml

    结果标品右边出了个峰

    上图样品进样小瓶中再加了点标品




    标品右边峰变大了(粉红色线)
    又走了一次的结果

    标品用乙腈稀释,定容是流动相,采取的排除措施:
    1 把标品用流动相稀释,保留时间和以前一样
    2 加标的样品进样小瓶用氮气吹干,换上乙腈稀释,保留时间还是跟原来一样
    请高手指点??????????????

  • 该帖子已被版主-一片枫叶加5积分,加2经验;加分理由:鼓励发帖,讨论求助。
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  • 浪淘沙隐

    第1楼2015/05/21

    多半是因为标样中因为不含其它物质,溶液略显碱性;而样品中含有其它物质,溶液pH和标样不一样,而流动相又没有缓冲能力,进标样时标样溶液使流动相pH提高,所以灭蝇胺这个碱性物质保留增强;进样品溶液时,流动相pH相对低一些,所以灭蝇胺保留弱一些。
    解决这个问题的方法是,使用缓冲盐,使得流动相pH不会被样品溶液改变pH,建议可以使用10mmol/L的磷酸二氢钾,用氢氧化钾调pH到7.0。

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  • 浪淘沙隐

    第2楼2015/05/21

    额,是氨基柱呢。氨基柱我没怎么用过,不敢保证是这个原因,但是也可以试一试。

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  • 一片枫叶

    第3楼2015/05/21

    应助达人

    视乎样品色谱图中根本就没有与标样成分相同的峰,怀疑是否样品中根本就没有你要分析的成分哦?

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  • 夏天的雪

    第4楼2015/05/21

    应助达人

    样品比标准品复杂,这种现象很常见,可以往空白样品中加入标品处理后做标曲

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  • hujiangtao

    第5楼2015/05/25

    应助达人

    把标样加到样品上机液中看看峰能否重合

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