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安捷伦氨基酸分析方法包使用过程中出现问题，色谱柱寿命太短，柱效急剧下降！！求解救

轩辕义

2015/05/21

液相色谱（LC）

小弟最近在做氨基酸分析，用的是安捷伦的分析包。做的是植物组织中游离氨基酸。具体为：衍生剂OPA，FMOC以及AAA的色谱柱，保护柱。硼酸缓冲液是自己配的，过o.22um滤膜。但是在使用过程中出现问题，通常一根保护柱做不了多少样品，30个左右不到。一根新的色谱柱（没加保护柱）就做了100针不到，然后峰型拖尾分叉等各种问题。论坛里有谁使用过安捷伦的方法的，大家使用的时候怎么维护的呢，一根保护柱大概能做多少样品呢。求大神们支招，感激涕零
具体为，色谱柱为AAA的氨基酸分析专用柱，保护柱是配套的一起买的。荧光检测器，流动相A：40mM磷酸二氢钠（色谱级，自配,过0.22滤膜），B为乙腈：甲醇：水=45:45:10(过0.22），流苏为2ml/min。经常出现问题，一根新的保护住做不多少样品20不到，然后就出现问题，拖尾，峰展宽，峰头变平，峰变胖，分不开等等。太多问题了
出现问题的图谱

分
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一片枫叶

第1楼2015/05/21

应助达人

色谱条件：检测器，流动相，流速，描述详细一些为好，最好有正常情况及异常情况下的色谱图，以便于分析讨论的。

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夏天的雪

第2楼2015/05/21

应助达人

色谱柱用的也是安捷伦的？

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轩辕义

第3楼2015/05/21

是的，方法包全套都是安捷伦的。然后安捷伦工程师说是样品的问题。我是做植物组织中的游离氨基酸。样品过0.22的膜
夏天的雪(bingwang228) 发表:色谱柱用的也是安捷伦的？

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一片枫叶

第4楼2015/05/21

应助达人

B为何要用甲醇和乙腈与水的混合流动相？

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一片枫叶

第5楼2015/05/21

应助达人

流速是否也太大了吧！

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一片枫叶

第6楼2015/05/21

应助达人

PH值调整的依据是什么？

0

一片枫叶

第7楼2015/05/21

应助达人

PH值调整的范围是多少？

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一片枫叶

第8楼2015/05/21

应助达人

AAA的氨基酸分析专用柱的具体型号：比如长度，柱径，粒径等参数？

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轩辕义

第9楼2015/05/21

这个ph我一般都是调到7.80附近，偏差0.02。流速2ml/min，以及流动相B的配比和组成都是是安捷伦方法包提供的，
一片枫叶(v2960432) 发表:流速是否也太大了吧！

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夏天的雪

第10楼2015/05/21

应助达人

用完之后有没有对色谱柱进行清洗维护呢，还有注意样品的pH值
轩辕义(v2817343) 发表: 是的，方法包全套都是安捷伦的。然后安捷伦工程师说是样品的问题。我是做植物组织中的游离氨基酸。样品过0.22的膜

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