仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

求助,MDQ 做SDS时,走样品缓冲液15分钟前后总是出现不规律的杂峰

毛细管电泳(CE)

  • 单位一台买了10多年的贝克曼MDQ,不经常使用,所以经验不多,以前做过EPO的CE,自制毛细管,按欧标EPO的CE检测方法,效果还可以。

    最近想做一些单抗的CD SDS,正好也有一贝克曼年代的SDS试剂盒(过期是肯定的,盒子见图),说明书也不见了,网上找了一份新试剂盒的说明书,按此来做。
    大概过程是先0.1N碱洗,再0.1N酸洗,然后再水洗,再上胶,再进样……为保险起见,先不上样,用试剂盒里的样品缓冲液代替样品,但发现总在15分钟前后出现不规律的峰,比较尖锐,早上开始第一次,出现一个或两个峰,接着再重复时,这些峰越来越多,似乎没有规律,不知怎么回事?是样品缓冲液的问题,还是毛细管,或者做的条件问题?
    水平和经验不足,特请教大家,谢谢!

    这是有些年头的试剂盒

    试剂盒里的胶液和样品缓冲液,下面所附的图都是跑的这个缓冲液

    早上第一次样品缓冲液,10-15分钟内出现两个峰

    第二次跑,峰的时间和高度有变化

    第三次跑,峰的时间和高度又有变化

    第四次,再有变化
  • 该帖子已被版主-nini2006加5积分,加2经验;加分理由:发帖
    +关注 私聊
  • szdavid1

    第1楼2015/05/21


    这是所用的方法,其中70PSI的压力改为了 40,各个过程时间延长了一些。

0
    +关注 私聊
  • CEcret

    第2楼2015/05/21

    从瓶子的标签看,过期将近15年。据我个人所知那个时候的CESDS配方和现在的不同。
    从你的图谱来看,这些杂峰尖锐且很窄,感觉像是气泡。你在开始的时候有没有做preconditioning,以及分离过程有没有两段加压。
    如果能看到电流图,会对我们分析问题有所帮助

0
  • 该帖子已被版主-nini2006加3积分,加2经验;加分理由:同意
    +关注 私聊
  • szdavid1

    第3楼2015/05/21

    谢谢!
    试剂过期好久,外单位要做样品,不太想再花近2万去买新的试剂盒了,所以,将近就着用用。
    另外,我试过不上样直接跑,结果没有这些峰,基本是平的一条线。然后我又用纯水上样,结果和上面差不多,感觉是只要有上样动作,不管是缓冲液还是水,就会出现上面的杂峰,也许真是哪里进的气泡。
    开始做过毛细管的预处理过一次,处理过程按说明书如下,这个处理每天都要进行吗?我看和走样的程序差不多,谢谢!

    电流图如下:

    CEcret(v2812644) 发表:从瓶子的标签看,过期将近15年。据我个人所知那个时候的CESDS配方和现在的不同。
    从你的图谱来看,这些杂峰尖锐且很窄,感觉像是气泡。你在开始的时候有没有做preconditioning,以及分离过程有没有两段加压。
    如果能看到电流图,会对我们分析问题有所帮助

0
    +关注 私聊
  • CEcret

    第4楼2015/05/21

    从电流和图谱来看,跟正常的不一样。目前的试剂盒电流会在25~30uA之间,并且会有特征的倒峰出来。如果你在分离过程中两端加了压力的话,气泡原则上是应该没有什么影响的。

0
    +关注 私聊
  • ericwong

    第5楼2015/05/22

    酸洗应该在碱洗之前吧?

0
  • 该帖子已被版主-beyond1977加3积分,加2经验;加分理由:应助
    +关注 私聊
  • nini2006

    第6楼2015/05/22

    首先应该先超声3-5分钟赶气泡,如果超声后还是有这样的峰说明这个试剂盒变质了。放了那么久,里面肯定长了很多比如微生物什么的有UV吸收的东西。建议不要再用了。

0
  • 该帖子已被版主-beyond1977加3积分,加2经验;加分理由:应助
    +关注 私聊
  • 王2015

    第7楼2015/05/23

    啥都不说了,重新配buffer吧
    记得之前活化柱子冲冲冲,能够超声都超声

0
  • 该帖子已被版主-nini2006加3积分,加2经验;加分理由:应助
    +关注 私聊
  • szdavid1

    第8楼2015/05/25

    多谢楼上各位,本人在深圳,有空欢迎到深圳来,请大家吃荔枝,现在刚开始上市
    我先重配一下  sample buffer 标签上有配方
    那个14-200 gel buffer 能自己配吗? 怎么配?

    王2015(v3004438) 发表:啥都不说了,重新配buffer吧
    记得之前活化柱子冲冲冲,能够超声都超声

0
    +关注 私聊
  • CEcret

    第9楼2015/05/25

    Gel buffer的配方厂家是没有公开的。也就是说自己配不了。。。但是我们提供类似的产品,已经私信你。感兴趣可以联系。

0
    +关注 私聊
  • ericwong

    第10楼2015/05/26

    官方提供的试剂绝大多数都不会给出具体配方,其实也就是为了防止私自配制。

    CEcret(v2812644) 发表:Gel buffer的配方厂家是没有公开的。也就是说自己配不了。。。但是我们提供类似的产品,已经私信你。感兴趣可以联系。

0
  • 该帖子已被版主-nini2006加3积分,加2经验;加分理由:说的没错
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...