【第5期有奖征集】色谱柱的安装,设置,老化和维护

我谈二点体会：1、填充GDX系列固定相时由于高分子多孔小球易产生静电，给填充带来困难，可以先用丙酮湿润固定相，使其呈疏松状，立即填充，效果很好。2、安装柱子时一定将填充固定相的进口接进样器的出口；否则柱效不好。

毛细管色谱柱的安装：

步骤1：检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等。 检查气体过滤器和进样垫，保证辅助气和检测器的通气畅通，如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物，需要将进样口的衬管清洗或更换。

步骤2：将螺母和密封垫装在色谱柱上，并将色谱柱两端小心切平，切面要平滑整齐。

步骤3：将色谱柱连接于进样口上。 色谱柱在进样口中插入的深度应根据所使用的GC仪器不同而定，正确合适的插入能最大可能地保证试验结果的重现性。通常，色谱柱的入口应保持在进样口的中下部，即处于进样针穿过隔垫完全插入进样口后针尖与色谱柱入口相距1～2cm，（具体的插入程度和方法参考所使用GC的随机手册）。
避免用力弯曲挤压毛细管柱，并小心不要让标记牌等带有锋利边缘的物品与毛细管柱接触摩擦，以防毛细管柱断裂受损。
色谱柱正确插入进样口后，将连接螺母拧上，拧紧后（用手拧不动了）用扳手再多拧1/4—1/2圈，保证安装的密封程度。不紧密的安装，不仅会引起装置的泄漏，而且有可能对色谱柱造成永久损坏。

步骤4：接通载气。 当色谱柱与进样口接好后，通入载气，调节柱前压以得到合适的载气流速。
将色谱柱的出口端插入装有已烷的样口瓶中，正常情况下可以看见瓶中稳定持续的气泡。如果没有气泡就要重新检查载气装置和流量控制器等是否设置正确，并检查整个气路有无泄漏，待所有问题解决后，将色谱柱出口从瓶中取出，保证柱端口无溶剂残留，再进行下一步的安装。

步骤5：将色谱柱连接于检测器上。 色谱柱与检测器的连接安装和所需注意的事项和色谱柱与进样口连接大致相同。如果在应用中系统所使用的ECD或NPD等，那么在老化色谱柱时，应该将色谱柱与检测器断开，这样检测器可避免被污染。

步骤6：确定载气流量，再对色谱柱的安装进行检查。 注意：如果不通入载气就对色谱柱进行加热，会快速且永久性的损坏色谱柱。
步骤7：色谱柱的老化。 色谱柱安装和系统检漏工作完成后，就可以对色谱柱进行老化，对色谱柱加热至一恒定温度，通常取其温度上限。特殊情况下，可加热至高于最高使用温度10～20℃左右，但是一定不能超过色谱柱的温度上限否则极易损坏色谱柱。当达到老化温度后，记录并观察基线，初始阶段基线应持续上升，在达到老化温度后5～10min开始下降，并且会持续分钟，当达到一个固定的值后就会稳定下来。如果在小时后基线仍无法稳定，或者在15～20分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能系统装置有泄漏或者污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降到40℃以下，尽快地检查系统并解决相关的问题，如果还是继续老化，不仅对色谱柱有损坏而且始终得不到正常稳定的基线。
一般来说，涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间较长，而弱极性固定和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。而PLOT色谱柱的老化方法有各不相同，须按色谱柱供应商提供的老化条件进行老化。

PLOT柱的老化步骤：

AT·Pora系列 250℃ 8h以上
Molecular Sieve（分子筛） 350℃ 12h
Alumina（氧化铝） 200℃ 8h以上
由于水在氧化铝和分子筛PLOT柱中的不可逆吸附，使得这两种色谱柱容易发生保留行为漂移，当柱子分离过含有高水份样品后，需要将色谱柱重新老化，以除去固定相中吸附的水分。

步骤8：设置确认载气流速。 对于毛细管色谱柱使用载气首选高纯度氮气或氢气，载气的纯度最好大于99.95%，而其中的含氧量越小越好。
如果您使用的是毛细管色谱柱，那么依照载气的平均线速度（cm/s），而不是利用载气流量（ml/min）来对载气做出评价，因为柱效的计算采用的是载气平均线速度。
推荐平均线速度值：
氮气：10～20cm/s 氢气：20～25cm/s
在载气的管线中加入气体过滤装置不仅可以延长色谱柱寿命，而且很大程度地降低了背景噪音，建议最好安装一个高容量脱氧管和一个载气净化器。使用ECD系统时，最好能在其辅助气路中也安装一个脱氧管。

步骤9：柱流失检测。 在色谱柱老化过程结束后，采用程序升温作一次空白试验（不进样），一般是以10℃/min从50℃升到最高使用温度，达到最高使用温度后保持10min，这样我们就会得到一张流失图。这些数值可以后作对比试验，并且对实验问题的解决有帮助。
在空白试验的色谱图中，不应该有色谱峰出现，如果出现了色谱峰，通常可能是从进样口带来的污染物。如果在正常的使用状态下，色谱柱的性能开始下降，基线的信号值会增高。另外，如果在较低的温度下，基线信号值明显大于初始值，那么有可能是色谱柱和系统有污染。

液相柱：
卡套柱的安装（不加预柱）
1．将卡套架套入柱芯
2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套（见左图）
3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片
4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧
5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端
6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手
注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清
洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。
卡套柱的安装（加预柱）
1．将卡套架套入柱芯
2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯（见左图）
3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片
4．将"子弹头"预柱放入卡套片内
5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧
6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端
7．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手
更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱）
注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲
洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉
滤片时带出柱子内的填料。
1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端
2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧
3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网
4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料
5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平
6．照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端
7．柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放入
8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平
平衡色谱柱
反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存
或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所
使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。
　　硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相
之前用乙醇或异丙醇平衡
如何平衡色谱柱？

平衡过程中，将流速缓慢地提高


用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）


色谱柱的再生
进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。

表1　建议用来冲洗的溶剂体

色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积
125-4 1.6ml 30ml

250-4 3.2ml 60ml
250-10 -20ml 400ml

请根据下表选择您的再生方法：


极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生：
正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**


非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：


水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水


0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱

注意：
在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再
用水冲洗至碱溶液完全流出。
**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
色谱柱的维护
1．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）
2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围


3．避免流动相组成及极性的剧烈变化
4．流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中
6．压力升高是需要更换预柱的信号

好像接色谱柱时分流和不分流时，色谱柱在进样口那端的长度也是不一样的吧

我们使用气相色谱仪，作空气分析。
使用的是毛细管柱。
在色谱柱的使用上有以下体会。
1、使用前要弄懂柱子的使用说明书，关键是老化方法，老化温度，最高使用温度。
2、使用中不能超过最高使用温度，我们都留有50℃的余地。
3、在使用前用超过试验最高温度10~20℃老化10~30分钟。
4、如果较长时间不使用，在开机前要通载气30~40分钟，使系统中可能有的空气全部被排除后才能开机升温。
5、试验完毕后要将柱箱温度降至室温后再关机、关载气的总阀，并让气路中的载气全部排出，防止柱箱温度小幅回升可能给柱子带来不利的影响。
6、载气压力尽可能不要太高。

我觉得第一次老化特别重要，否则用不长时间就已经流失，以后再怎么维护也无济于事了

不敢苟同，以后的使用中如果做了很脏的样品还是要老化的，根据柱子的情况选择相应的维护，这是起码的专业知识

1、建议在将色谱柱安装到GC/MS接口之前先进行老化。色谱柱和进样口第一次加热时，管路中的挥发性物质和一小部分柱固定相会进入载气，然后被载气带入MSD，并在MSD离子源上沉积下来。这将会降低MSD的性能。在安装到MSD之前先进行老化，将会减少带入离子源的污染。
2、柱子必须置于柱架上，毛细管柱的任何部分都不能接触柱箱壁
3、保护柱是一段熔融石英管，用接头连接至分析柱的前端，保护柱具有以下特
征：
• 材质应当是脱活的熔融石英管以使溶质相互作用最小
• 长度应当是1-10米。5-10米的典型长度允许在更换整个保护柱之前进行切割
修整(截去被污染部分)
• 内径一般与色谱柱相同。较大内径的保护柱可用于增大残留容量采用保护柱是为了将非挥发残留物对分析的影响降至最低。非挥发残留物积聚在保护柱上，而不会积聚在分析柱上。这样将极大地减少残留物与样品之间的相互作用。一旦积聚了残留物，就需要对保护柱定期切割或整理。峰形问题的产生通常表明保护柱应该整理或更换。
4、色谱柱贮存
当毛细管色谱柱从GC拆下时，应该贮存在原来的盒子里。将GC隔垫插在柱两端以防止碎片进入柱内。一旦要重新安装色谱柱，则需要从柱头截去2-4厘米以确保隔垫碎屑不会堵塞在柱子内。

理论上应该是不一样的，但是实际应用也没有人再去调那个进样口端的长度
我想这应该不会有太大差别的