动物源性食品中喹诺酮类物质检测的固相萃取方法

逗点生物

2015/07/15

私聊

液质联用（LCMS）

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为猪肉样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化猪肉样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。
二、实验目标物
三种喹诺酮类药物：依诺沙星（CAS:74011-58-8；84294-96-2），洛美沙星（CAS:98079-51-7），麻保沙星
（CAS:115550-35-1）。
三、应用范围
本方法适用于动物源食品中喹诺酮类药物LC-MS/MS检测及确证。
四、参考标准
进出口行业标准《SN/T1751.2-2007动物源性食品中喹诺酮类药物残留检测方法；第2部分：液相色谱-质谱/质谱法》。
五、实验材料
Biocomma® PolybaseTM HLB固相萃取柱3mL/60mg。
六、实验方法
1、样品提取
称取均质试样5.0ｇ试样（精确至0.01ｇ）于50mL离心管中，加入20ｍＬ乙腈，涡旋混合1min，超声提取10min，
10000r/min离心，提取三次，合并上清液。
2、SPE柱净化
(1)活化：加入6mL甲醇，6mL水活化。
(2)上样和洗脱：当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，以2mL/min-3mL/min的速度过柱，弃去滤液，用2mL5%甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，将小柱抽干，在用6mL甲醇洗脱并收集洗脱液。
(3)浓缩定容：50℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用1mL0.2%甲酸水溶液溶解，1000r/min旋涡混合1min，上液相色谱-质谱仪检测。
3、LC-MS/MS条件
色谱柱：VenusilASBC18（2.1×150mm，5μm，100Å）
质谱仪：API4000
A:乙腈溶液；B:0.1%甲酸的水溶液
表1流动相梯度洗脱程序

时间/min	A(%)	B(%)
0.00	13	87
2.00	13	87
5.00	90	10
10.00	90	10
10.01	13	87
16.00	Stop

流速：0.3mL/min
柱温：40℃
进样体积:2uL
离子源：电喷雾（ESI），正离子模式检测方式：多反应监测（MRM）

七、实验结果
1、猪肉基质10μg/kg加标回收结果：
三个平行测试样的平均回收率均大于80%，平行样间相对标准偏差均小于5%，符合标准要求。（见表4）
表4猪肉中10μg/kg加标回收实验结果

名称	1	2	3	平均回收率（%）	RSD（%）
依诺沙星	90.12	89.65	88.32	89.36	1.04
洛美沙星	92.36	87.39	88.36	89.37	2.94
麻保沙星	81.69	80.65	84.95	82.43	2.72

2、空白样品中添加喹诺酮类残留物色谱图

本研究是逗点生物利用固相萃取法作为猪肉样品的前处理方法，以进出口行业标准《SN/T1751.2-2007动物源性食品中喹诺酮类药物残留检测方法；第2部分：液相色谱-质谱/质谱法》为标准制定，本方法适用于动物源食品中喹诺酮类药物LC-MS/MS检测及确证。