测定食品中磺胺类药物残留的案例

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2015/08/04

私聊

兽药/抗生素检测

一、案例
磺胺类药物是一类应用最早的人工合成抗菌药物，能抑制革兰阳性菌及一些阴性菌，可以治疗多种细菌感染，具有抗菌谱广、疗效强等优点。磺胺类药物特别是磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲基异嗯唑等作为饲料添加剂或动物疫病治疗药物被广泛应用。然而磺胺类药物在体内作用时间和代谢时间较长，过量使用必会导致磺胺类药物在食用动物产品中的蓄积。食品磺胺类药物残留，可引起过敏、中毒和导致耐药性菌的产生，它还能引起造血系统障碍，发生急性溶血性贫血、粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血等。
二、选用的标准
农业部1025号公告-7—2008动物性食品中磺胺类药物残留检测——酶联免疫吸附法。
三、测定方法
1．样品的制备与保存
取新鲜或解冻的空白或供试动物组织，剪碎，置于组织匀浆机中高速匀浆。取鸡蛋去除壳后用均质器500r／min匀浆20s，使蛋清和蛋黄充分混合。将已制备的样品在-20℃冰箱中储存备用。
2．提取
称取样品(2.00±0.02)g于50ml离心管中，加乙腈8mL，振荡20min，4000r／min离心5min：分取上清液2.5ml。于10mL离心管中，于50℃水浴下用氮气吹干；加正己烷1mL，涡动20s溶解残留物，再加缓冲液工作液1mL，涡动1min，4000r／min离心10min，取下层水相20μL分析。
3．测定
①使用前将试剂盒于室温(19～25℃)下放置1～2h。
②每个标准溶液和试样溶液按两个或两个以上平行计算，将所需数目的酶标板条插入板架。
③加系列标准溶液或试样液20μL于对应的微孔中，随即加酶标记物工作液50μL／孔，再加磺胺类药物抗体工作液80μL／孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，置25℃避光反应60min。
④倒出微孔中的液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，以保证完全除去孔中的液体。再加洗涤工作液250μL／孔，重复操作两遍以上(或用洗板机洗涤)。
⑤加底物液A液和B液各50μl／孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，室温下避光反应30min。
⑥加终止液50μL／孔，轻轻振荡混匀，置酶标仪于450nm波长处测量吸光度值。
4．结果判定和表述
用所获得的标准溶液和试样溶液吸光度值的比值进行计算。
相对吸光度值(％)=B/B0×100％
式中 B一一标准(试样)溶液的吸光度值；
B0——空白(浓度为0的标准溶液)的吸光度值。
将计算的相对吸光度值(％)对应磺胺类药物标准品浓度(μg／L)的自然对数作半对数坐标系统曲线图，对应的试样浓度可从校正曲线算出。
方法筛选结果为阳性的样品，需要用确证的方法进行确证。
5．竞争物的交叉反应率
见表1。
表1竞争物的交叉反应率

竞争物	交叉反应率／％	竞争物	交叉反应率，％
磺胺二甲嘧啶磺胺二甲氧嘧啶磺胺二甲基嘧啶磺胺嘧啶磺胺甲基异毂唑	100 23 12 <1％ <1％	磺胺噻唑磺胺吡啶磺胺喹彀啉磺胺问甲氧嘧啶	<1％ <1％ <1％

6．试剂
①乙腈
②正已烷
③十二水合磷酸氢二钠。
④二水合磷酸氢二氢钾。
⑤氯化钠。
⑥氯化钾
⑦磺胺类药物快速检测试剂盒：2～8℃保存。
a．系列标准工作溶液：O、1μg／L、3μg／L、9μg／L、27μg／L、81μg/L。
b．包被有磺胺类药物偶联抗原的96孔板，12×8孔。
c．磺胺类药物抗体工作液。
d．酶标记物工作液。
e．底物液A液。
f．底物液B液。
g．终止液。
h．20倍浓缩洗涤液。
i．20倍浓缩缓冲液。
⑧洗涤工作液：用水将20倍浓缩液按1：19的体积比进行稀释(1份20倍浓缩洗涤液+19份水)，用于酶标板的洗涤。2～8℃保存，有效期1个月。
⑨缓冲工作液：用水将20倍浓缩缓冲液按1：19的体积比进行稀释(1份20倍浓缩洗涤液+19份水)，用于酶标板的洗涤。2～8℃保存，有效期1个月。
7．仪器
①酶标仪(配备有450nm滤光片)。
②氮气吹干装置。
③均质器。
④振荡器。
⑤离心机。
⑥天平(感量0.01g)。
⑦微量移液器(单道20～200／μl、100～1000μL；多道250μL)。