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转基因油菜籽检验

  • 空空的天空
    2015/08/12
  • 私聊

食品安全/营养与健康

  • 油菜是一种重要的油料作物,是世界四大主要油料作物之一,在加拿大、印度、中国和欧洲种植面积最大。自1985年Ooms等获得第一棵转基因油菜植株以来,在国内外广泛开展了一系列的研究工作,抗病、抗虫、抗除草剂及高产量、高品质的转基因油菜相继诞生,部分品种已进入商业化或大田试验阶段。近十年来对转基因油菜的研究取得了长足的进展,其中以抗除草剂的“双低”(低芥酸、低硫苷)油菜为主。
    一、检测原理
    样品经过提取DNA后,针对转基因植物所插入的外源基因的基因序列设计引物,通过PCR技术,特异性扩增外源基因的DNA片段,根据PCR扩增结果,判断该样品中是否含有转基因成分。
    二、试剂与材料
    引物:根据表11—17的序列合成引物,加超纯水配制成100μmol/L备用,直接用于PCR测试的引物浓度为5μmol/L。
    Tris饱和酚、三氯甲烷、液氮、异丙醇、70%乙醇、重蒸水、RNase A、2mg/mL溴化乙锭、DNA分子量标准(100~2000bp)、琼脂糖、10×氯化镁(25mmol/L)、Taq酶(5U/μL)、10×dNTP(含2.5mmol/L dATP,dUTP,dCTP,dGTP)。
    lmol/L Tris—HCl缓冲液(pH 8.0):称取121.1g Tris,溶于800mL水中,搅拌,加入浓盐酸42mL,冷却至室温,用稀盐酸准确调整pH至8.0,分装后高压灭菌备用。
    0.5mol/L EDTA(pH 8.0):在800mL水中加入186.1g EDTA-Na2·2H2O,磁力搅拌器剧烈搅拌,用氢氧化钠调节溶液pH值至8.0(约需20g氢氧化钠颗粒),然后定容至1L,分装后高压灭菌备用。
    DNA抽提缓冲液:量取100mL lmol/L Tris—HCl和50mL EDTA,称取5.0g SDS和16.848g氯化钠,定容至1L,分装后高压灭菌备用。
    TE缓冲液(pH 8.0):量取10mL lmol/L Tris—HCl(pH 8.0)和2mL 0.5mol/L EDTA(pH 8.0),加水定容至1000mL,分装后高压灭菌备用。
    10×PCR缓冲液:含500mmol/L氯化钾,100mmol/L Tris—HCI(pH 8.3),15mmol/L氯化镁(MgCI2),0.1%明胶。
    50×TAE缓冲液:称取484g Tris.量取114.2mL冰乙酸,200mL 0.5mol/L EDTA(pH 8.0),溶于蒸馏水中,定容至2L。分装后高压灭菌备用。
    10×上样缓冲液:含0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯青FF.30%甘油水溶液。
    三、仪器
    [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp]基因扩增仪、电泳仪、电泳槽、凝胶分析成像系统、DNA冷冻干燥离心机、冷冻离心机、DNA分析系统、水浴锅、微波炉、微量加样器(0.1~2.5μL、0.5~10μL、2~20μL、10~100μL、20~200μL、200 1000mL)、天平(感量0.001g)、高压灭菌锅、PCR反应管(200μL、500μL两种规格)、Eppendorf离心管(1.5mL)。
  • 该帖子已被版主-mengzhaocheng加5积分,加2经验;加分理由:谢谢分享,希望常来食品安全版块。
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  • fslin

    第1楼2015/08/13

    个人认为转基因食品安全性有待考验。

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  • 夏天的雪

    第2楼2015/08/13

    应助达人

    貌似资料不全,没有看到表11-17,楼主可以直接将文件分享出来

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  • jiuhuakeli

    第3楼2015/09/14

    这个方法可以试试

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  • 我爱吃芒果

    第4楼2015/09/18

    转基因食品不那么安全吧?感觉还没有被广大人们所接受

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  • 夏天的雪

    第5楼2015/09/18

    应助达人

    现在人们对转基因还是比较敏感的,但是却其好坏还没有定论

    我爱吃芒果(v3005330) 发表:转基因食品不那么安全吧?感觉还没有被广大人们所接受

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  • mengzhaocheng

    第6楼2015/09/30

    应助达人

    实验结果怎么样?转基因食品和非转基因食品相比,有哪些成分是不一样的呢?

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  • emmalee07

    第7楼2016/03/21

    应助达人

    其实我们大众想了解的就是转基因不安全的点在哪里?还有就是真的不安全的话在市场上应该就买不到转基因的食品吧

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