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鲜乳中β一内酰胺类抗生素残留的TTC法分析

  • 空空的天空
    2015/08/29
  • 私聊

兽药/抗生素检测

  • 一、实验目的
    掌握氯化三苯四氮唑(TTC)法测定牛乳中抗生素残留的原理和方法。
    二、实验原理
    本法以氯化三苯四氮唑(TTC)作为抗生素残留量测定的指示剂。当乳中加入嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)后,如果乳中不含抗生素,则嗜热链球菌生长繁殖,可将无色的氧化型TTC变为红色的还原型TTC,所以乳变红色。相反,如果乳中有抗生素存在,则嗜热链球菌不能生长繁殖或生长繁殖受到抑制,无色氧化型的1vrC不能转化成红色还原型的TTC,乳不变色。
    三、仪器与试材
    1.仪器与器材
    恒温培养箱、恒温水浴锅等。
    2.菌种
    嗜热乳酸链球菌(Streptococcus thermophilus)。
    3.试剂与溶液
    TTC溶液(4%):称取1g TTC,溶于5mL灭菌蒸馏水中,装入褐色无菌瓶内于4℃避光保存,临用时用无菌蒸馏水稀释5倍。如遇溶液变为黄色或淡褐色,则不能再用,需重新配制。
    4.实验材料
    2~3种鲜乳,各50mL。
    四、实验步骤
    1.菌液的制备
    将菌种接种于灭菌脱脂乳(113℃无菌20rain)中,于(36±1)℃培养15h后,以灭菌脱脂乳1:1稀释,待用。
    2.样品测定
    (1)取鲜乳液样品9mL置于试管(18mm×180mm)中,80℃水浴加热5min,取出冷却至36℃。
    (2)加入菌液1mL于乳液中,于(36±1)℃水浴培养2h后,再加0.3mL TTC溶液,(36±1)℃水浴培养30min后,观察颜色变化。
    (3)如果样品变为红色,则表明抗生素残留为阴性;如果样品颜色不变,则应于水浴中保温继续培养30min后,观察,仍不变色者,则为阳性。
    (4)在实验过程中,可以做阴性和阳性对照各一份。阳性对照管以8mL无抗生素的乳,添加1mL一定浓度的抗生素(如青霉素、庆大霉素)溶液、菌液和TTC溶液;阴性对照管为9mL无抗生素乳、菌液和TTC溶液。
    3.结果报告
    综合上述测定结果,并与对照管进行比较,分析样品中抗生素是否超标。
    五、注意事项
    1.嗜热乳酸链球菌菌种在脱脂乳培养基或在10%脱脂乳粉培养基中保存,并且不得含抗生素,每次转接间隔时间不能超过20d,否则可能会绝种。
    2.在观察结果时,应该迅速并避免长时间光照。
    3.TTC法对几种抗生素的检出限见表1。
    表1 TTC法对几种卢一内酰胺类抗生素残留的检出限
    ┏━━━━━━━━┳━━━━━━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━━━┓
    ┃ 抗生素名称 ┃ 最低检出量/U ┃ 抗生素名称 ┃ 最低检出量/u ┃
    ┣━━━━━━━━╋━━━━━━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫
    ┃ 青霉素 ┃ 0.004 ┃ 庆大霉素 ┃ O.4 ┃
    ┃ 链霉素 ┃ 0.5 ┃ 卡那霉素 ┃ 3 ┃
    ┗━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┛
  • 该帖子已被版主-马踏飞燕加10积分,加2经验;加分理由:好资料
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  • 马踏飞燕

    第1楼2015/08/30

    应助达人

    好资料共分享,欢迎讨论

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  • lhq84142248

    第2楼2015/09/24

    β一内酰胺类 杯碟法检测

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  • lhq84142248

    第3楼2015/09/24

    我做过试纸条的筛查 前处理很简单

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  • 栀子花开

    第4楼2015/09/30

    应助达人

    很好的资料,但现在这个方法用得不多吧,太费时间了

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